UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MEXICO FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA K8TUDIO INMUNOLOGICO DEL TUMOR WENEllEO TRANSMISIBLE CANINO. MODELO EXPERIMENTAL DE CANCER T E s s QUE PARA OBTENER E L T 1 T U L O O E MEDICO VETERINARIO ZOOTEONIST A PRESENTA ~·· PEDRO DIAZ ESQUIVEL MEXICO, D. F. 1972 UNAM – Dirección General de Bibliotecas Tesis Digitales Restricciones de uso DERECHOS RESERVADOS © PROHIBIDA SU REPRODUCCIÓN TOTAL O PARCIAL Todo el material contenido en esta tesis esta protegido por la Ley Federal del Derecho de Autor (LFDA) de los Estados Unidos Mexicanos (México). El uso de imágenes, fragmentos de videos, y demás material que sea objeto de protección de los derechos de autor, será exclusivamente para fines educativos e informativos y deberá citar la fuente donde la obtuvo mencionando el autor o autores. Cualquier uso distinto como el lucro, reproducción, edición o modificación, será perseguido y sancionado por el respectivo titular de los Derechos de Autor. "ESTUDIO lNMUNOLOCICO DEL TUMOR VENEREO TRANSMISIBLE' CANINO. MODELO EXPERIMENTAL DE CANCER " Est~-,ti-~~jo se realizó bajo la dirección de : M. V. z. Gustavo FRANCO FRAGOSO ·M,v.z. Alfredo CORTES .i\RCOS M.v.z. Pablo HERNANDEZ JAUREGUI Dr. Héctor GOMEZ ESTRADA Agrad~zci;i la ayuda brindada por el Departamento de lnvestig¡do~ CientÚica del Instituto· ~cixicario • .·•del Se~\lro :;>-~:.-"·;('._:_ _ ;. .. _..: :---··.::_<: ··:><;;(-. - ;. .- .' ~ ~- _:;<.::::·_··;· ..' ._~,-. . . -. > : . ';:..·· _- te sis pr,oíe si~na! pa;ra obterier el titulo .de. ~edico veterinario; :- --,_ . jP;st~riorrrie~te Wel'.h en 1888;. confirmó este ~~- .· peri~entoy:s~Üke~ en 1'904:\0.~~r~~te~izÓ histolÓgicamente d~ ah( que selc ·· ·. con~zc~~~a.ril~i~~·'c¿t?io~t~~r d~ Sti~,er .t •· . E.s una n~oplasfa e o~sfü~Ída · - ~;-.;, ,Pº~~ei~ii~f·e,iichr;r~~. de distribución m~ndial, cuya estructura histolÓgi~ .· ca ~a'pé:ia.n~cido ·estable desde hace mucho.s· años; .de .malignidad uniforme,. la·~u:aLsÚ~~bargo permite observ~r al animal por pedodos prolongados, y. · ~or\ ;resentar un patrón cromosómico constante,Jo cual hace pensar en que. el factor que permite su transmísibifidad sea mas bien el.trasplante de célu· las neoplásicas complete.s mas que el causado por un agente viral •. El hecho i de que el tumor se extienda por contigüidad y que raramente metastatice per· 1 ( mite la sobrevida del animal durante períodos prolongados de observación. f Sin embargo el curso clínico en cada animal en particular puede ser v:iriable lo cual permite un estudio diversificado de las relaciones tumor-portador 2 El tumor se localiza frecuentemente en la vulva r vagina de la hembra, y en el pene y mucosa prepucial en el macho, Su tran!_. misión es por contacto sexual y es posible trasplantarlo por implantación s~ cutánea de células 3 Cuando la evolución del tumor es a la curación es'." ..· · 4 pontánea., se explica como un rechazo de tipo itunune por parte dot hi;.ésped - 2 - .Existe la duda acerca de su etiologi'a viral, aunq\le se han observado par­ tículas con moríologi'a viral al microscopio _el_ectrÓ,llif_()_ _ 3~--:~-~- Antecedentes IrununolÓgicos en Neoplasias Loeb 6 observó que ~nt~~~dÜi~1~~es era •-··· -/.-"-:·¿~;-· . .; el· trasplaatable a una raza de ellos y no a otra. Ehrlichy Sch§ne>. . ~~scri- bieron el efecto inmunizante de tumor murino, el cual ~ra}~ch~za:do aceier_! 1 ' • • - • - • • damente cuando el receptor de la neoplasia erá inmuni~ado' ~on antí'g~n~é ~~- morales o cutáneos del donador especi'rico de la neoplasia. Tyzzer-6 :,estu~ ,,_-·.--. l diÓ la susceptibilidad de tres generaciones de ratones al traspla~te neopiá~i~·o y concluyó que ella no era condicionada por caracteres hereditarios~ ijf,~~~-}>p . reconsiderando los datos de Tyzzer, demostró que la susceptfüili~ad:;~/~Pi/ • 6 regida por las leyes mendelianas, como afirmaron ambos en191~ • Uttle , - ., : ; :_ _ ,~ ·._:·_'.'.-_·:-_-:_ _ ._L·:-~ -~ 6 y Strong en 19Z4 demostraron que el crecimiento progresivo del t\lri:;6r: trasplantado puede ocurrir en condiciones de incompatibilidad con él;~¿epfoI" •. . _-_ ·. -· El sistema de anti'genos tisulares de histocompatibilidad -ho;· u~ma.d~s a~ti-, genos de histocompatibilidad-, era desconocido hasta entonces y el créci- -~ 1 miento del tumor trasplantado era considerado un problema de nut~~ción de .• 1 ( las células tumorales que salameme se pocií'a satisfacer en determinad_as ra,- 1 zas de receptores y, la reacción de rechazo no era considerada dé tipo itir?u~ ~ . 7 nologico, a pesar de que Wadc en 1908 habi'a descrito la reacdG~ de· re.::. ",~"":->' :: ..: ( :. 1 del tejido tumoral por linfocitos y células plasmáticas", Da Fano en·19U . enfatizó la importancia de dichas c~lulas en la reacción de rechazo;~del~~.in.; jertos tumorales, pero la función inmunológica de ellas era aún,desConotida. 8 Gracias a los esfuerzos del Dr. Strong, a partir ele 1.921. • se.tuvo 13: c..ispo­ - nib!lic1ad de las cepas puras de ratones s~ng~nic:osy_e_n esta forma se ixli.ció. : 9 - - con Gorer en 1936 el estudia de los ant(genos de histocompatibilid~d mu-· rinos y de los ant(genos tumorales. Antígenos Neoplasia Espedficos (ANE) en Afecciones Malignas. 10 , Groas en los años 1941y1943 encentro que en animales de cepas puras es posibl_e inducir inmunidad contra neoplasias pro- vacadas por carcinogenéticos qu(micos. Habitualmente se atribuye a Foley 11 - .. en 1953 el haber demostrado en,inirnales. singénicos que el' trasplante f:u.;. . moral tiene ANE y que·. el empl~~~d~ ll1it~(): hifrl~alÓgic~~ pod(aserutili~ • • • ' • ' ' .. o. •• ~ ... ·;_- - • • ' i •• ' • • ' . • , - - . - . ' ¡ • - - zado para modifica~ el creciiiil.erit:o clel tumor experimental, lo cüal.Cué a.trl- - ··. ·.·· · > ·: > > < _-· .··-.•·_ lZ plfamenteéonfirmad~ Pºt préhn en 195J ' ' .. ·•• ::,;:> 5¡ s~ í emplea una substancia carcinogenética para :inducfrt~·a#~~i~t6~-~~m~oplasias 1 en una serie de animales. de la misma cepa,' , '.< -:·:'';_,,·'1;-:._"->:.~>-~·.,·.- :::::-<:· __ .··:, : - ,, ' . 1 el tWTlor ·que;s~:obtiene presenta antlgenos diferentes en cada atúmal y los ( aÓ.l:icu'.el°pos ~~ntra dichos ant(genos casi no dan reacción cruzada entre e.!:los, ,' 1 -~. l ._ . .._ ;: __ \ ••• • - : - - •• '_ •• .: •• lo ci.taLindica que la naturaleza quÚni.ca del antí'geno puede ser diversa de.in.:.. ( ¡ ¡ dividuo a individuo., está condicionada po~ el portad~i:de la n~Pplasia y no p~r ~:, ·-·.:.:: '· '·.· e 1 carc1.n ogene~t.1 co qui.. .mi co 13 " ~;:,:. ,~::.- Por el cóntrarió. • ~~%~i-l.;tt~~¡¡'c(;;~cfóI1~~~opi~~ sic~ es inducida por virus onccig~mC:i~.:las~~lJ~j'liugnas presentán aiit(;. . ... 14 genos comunes y reactividad cruzada de. los anticuerpos anti .. ANE En las nellplasias éxperimentales espontáneas, en las qtie no se puede implicar una etiolog(a química o viral, también e..xistc re• actividad cru~ada l S , - 4 - • ~Encla'especie,huma.na.,.~·dtiaspfari.te,~dt?~<:Jl~;i~···· ··· ..• .. >/ .. ~J'.L¿16rf7'.:·.···~ ,< •·.··.· neoplásicas genera anticuerpos contraJos ANE <· ' ···••· ~,r;ifabie11 las neopla_. ' ,,, 0 -·<-·._::.~;·\ ~ ~!..<'· sia s de a parid ó1l e spont.tne a 9 Ón in'.ól~~~g·~f~Js'J:~.~~3;~~.~~i~;~~.~~ ci(i~ misma 18-19 " ; -,L>• . •.· ':·. ,'),',/'.''./;:' -··-).,::·~~· de experimentación como en humano~: 1~~'2f~~;;i.~\J1norales presentan ANE '>·:-~ ,;· capaces de suscitar en el portador l~~rodu~hi_ .0'> .. ~-p~rti{de 1966 se ha acumulado gra~~~~cl.'d: .,,,_ infor.mac.ión.~ri-:~eÍ,¿i~i§ri'·~pn·i~inJi\lnogeoicidad que el twnor. de B{i~Jqtt h\l~ ~ ._-,: - 1IlªÍl? ~t,~~~~f·R~~~;~(P()~t~~~r~~-la neoplasia. La primera d~~ost~atió~ 1 - 1 de J..~:~~:-~-~}~Ü~~~~-f~~;-~?~j~~#~ y Henle; empleando la téc~~ a ¡ dé .; ~ - ;.:··· ', .. :'· :_ : .- ·. ... :.:;,-i::r;.'i.\_¡,:;;•:•.·•-,;.:i<}:;\•;;;::;, • _ 37 .· .. _--. ---·-··-·--- - .. - 1 U:unwio_íluor_eséencia con:sll~ro•del proPiO paciente. El). VÍV()> _estos antlge- , •••• > ~-:.-.:-· ;, - -. ,,- ;•_-,;--__ •_ _ ,.~·-:\-":<·. . ~-~_) .::::':·2.~.'~~"-.. ". 1 ~ nos ·a~ eíl~heI1t~íui'~ilbfe8t'o6 :pór anticuerpos .y solamente se b..icen aparentes -. :--.•··->>•-- ,/·_->·•- ·· - ,, .- ~ -.·:·:· ;.:. .3s""4o. despues de. ma¡iténer\en-cultivo durante unos dias la.s celulplasia. existen partl'culas virales intracelulares a las qu~ ~:~h~ - 44-45 ' • : .i.\ < ha denominado virus de Epstein-Barr que pueden ser recoo~d-~os_por inmunofiuorescencia o por microscop{a electrónica dentro de i¡ ~:·á~i'fu-a_) ligo.a o en su membrana, el e~ se ha relacionado a la a.pari.{t4D:cld2ANÉ:i-~-· través de la modificaciÓn del genoma celular 46• 47 En el ca.rcinom.a nasoíarÍngeo en l::lurilá.J:íc:>~, que ~s_ .,. -\.·i; »' '- ·, . .:" :··~:.-::;;.,:.'·~·,-(·'.~~'..'./· . . : . una forma de neQplasia en cierto modo semejante al tumor de;Burk;itj:;,pero · ."·{:,: ¡·-·· con diícreoJ:e localiza.ciÓn a.na.tómica, con disúnil distribuci6D:se~gr~fl~a y - 6 - que se presente conmayor frecuencia en un grupo étnico distinto, se han. 48 encontrado anticuerpos contra los ANE En el siguiente grupo de enfermedades malignas humanas, se ha comprobado una situación similar: en el melanorna maligno 49-52 , en el neuroblastoma 53 , en dife rentes ti. pos d e sarcomas 54-57 en e 1 cori.o carc1. noma h wnano 58-60, en e 1 a d enocarc1. noma pap ili. ..í ero del ovari. o 61 , en 1o s carci.n omas: ga.. strt. co 62 , d e p u1 mo, n 63 emb ri.o nari.o 64-68 ,. 69 .- de colon y en el hepatico y renal por diferentes técnicas imnuÍ>.016;. 31-35 70-82 37, 48, 83 gicas y en las leucemias y lin!omas - 7 - OBJETIVOS DEL PRESENTE TRABAJO Llama la· aten~iÓn que en ~l t:u.l'J;;,;~d:;sticke:r-, · primer tumor trasplantable experimentalmente que se conoce:.~o~~'~hayan llevado a cabo estudios imnunolÓgic os tendientes a dil~ci~~}as j~~Ji~~es · .. éxistep.te~ entre la neoplasia y el portador de la misma..· ·Reviste particular interés la ínvestigaciói;ide los diferentes puntos l. - Encontrar una explicación satisfactoria acerca de el porqué dicha neoplasia es trasrrúsible o trasplantable con :relativa facilidad entre individuos de la misma especie a pesar de - existir entre ellos grandes dif~rencia.s genéticas y ti.sÜlares. z. - Lnvestigar la presencia de ant(gé1;10S esp~cí'ficos d~ la ~~h~a neoplásica {ANE). plasia eapecÍficoe en los ;n;&aj,\;¿;;~·ff;l\i~'i~~··4~Ffühjo,r,"· (anti--ANE). · ... ;;; /' ~, ~' ".·.·.c. .~. :. · · , · · · " .-" '~::: ·-, ¡_ _ ·,:/.<: - :~!..:'":'.!·;: .. ~'' 4 •.• 1 lulas malignas'. <: ,:/.- ··~ ::::_ -...=.. s. - Tratar de dilucidar porqué la respueflt~ii:llri~, sf'es'q'ue;se; lulas malignas y la erradicación del.tumor. ·- 7 - OBJETNOS ~ELPREsENTE TRABAJO Llama la atenciÓn que en el tu.mor de Sticker, éXi~tei"ltesi'.~J:lt:f~ia;n~ciplasia y el portador de la .Ínisma~ ·';< '·'' ;· ~ ·... -. ' ' .' .. " - . '.· : . . ·" .. ;· :•: . ""·· - : ,.. ~-: ; .· ~ .. ~.:C.-,~-~~'::..<:,·-·'.'.-:~·-<<-··:.:· -:_', • ,,-·· - :.:' - '_ __ , ·:.:,~:->~):~-.·-.. ~. -:-:~:~.~.:~;-, l;. ;. _. •E 1,1;:ontrar una explicacion satisfactoria ace,rca cie E!l\_p()rque dicha. ne0plasia es tras~sible o t~asplallta~l~.c~\:.~~l~tiy~ .. .,_,,.· ,;.-~. " facilidad entre individuos de la misr?ui. ~speáe;:a..p·eiíar de :.: existir entre ellos grandes di!erenci~j~~~tÍU~~·~~f'.Js~ar:~·~ ¡' ' z.- neoplásica (A.NE}. 3.- Averiguar la producción de ~·~~~~:~~.'.:i~~~%(i~ii·g~.N~6.!· ·· plasia específicos en los ~3:\~~~~-~\ct~~~;5~f¡~~ÚÜmo.~ "''- ,:1 (anti-ANE). 4. - Investigar la presencia de die.has anticuerpos unidos a las cé- lulas malignas. S. - Tratar de dilucidar porqué la respuesta inmune, si es que se encuentra, es incapaz; de llevar a cabo, el rechazo de las cé- lulas malignas y la erradicación del tum.or. - 8 - MATERIAL Y METODOS •. ~· Se utilizaron 17 perros raza indefinida en quienes se enco~~;:s:~rt~~~;~~e~s't~;:;cf;;:ioj~dos ~n~JaUlas incffVi.duales y alimentados ~º~ aH.iri~~fc{(:()~~.~ciaÍ.' i·~~~te iiúri-iero están incluidos . dieciseis machos/;;~;;.~~W~·ªi·r lt~6~i~9/{sporitán~o en pén~.··1 en va• gina y 2 con turnbi¡Í:~·~~l~·~tlcii:'~ilb~\l~~~~rrie~ie;.·~rie; ~or~o tomado ele los ··;,'.;.',:':·,'· :::::.;·:··.,·-·, perros. nÚ~er~}hy'2~~í;i4;.91Sf'i:~~p~~tivadiente dos me~e~ ant~!l. ''IJe.~llos -, -:~, ~.,,-;-.'--;:; ,_:..¿ '.- <·:-Jút!:- ,,., l· est~b·a:: _.'e ·"r. . i ~·..i ,,,e ,_·,. c,: irh1J!lt<>~¡;r¡;s~~sivo y: t6 en rase ~sta'~io~ria: : N¡~·s~ri' i>et"i:o :~ _:~ ~rj>:'~-~~:'~:.:::'·'.~, _:.,: :: ·. ~. -_.- · . · _ . ,-, .,, . .. ., _ , .. , :,:-;~·- _.· _- . . . , mostralia.·~ign'.ci~{;~e .f:~gf~sión espontánea del tumor• . (Fig.:l,)l ; ..· f\t . Células tumorales. Se tom¡·ron bio~llÍ¡s,d~l tu- .-<-•· ,-- - ,- ···.· -.- _, . ·' mor aproj(¡~~m~,nfo. 3x3x3 mm, mensualmente po~.·tioes ve~~s .c~daperro.· .:"·" (';~~:;., :;:::;: Las biop~i¿~[~~rdrí.'col~adas inmediatam~nte enme.dio de cultivo para te- Jido~;'.~.,f;;C;y.5~5¡{:~1ri 'sue'ro"de ternera· (G~and ·rsland ·siological Laboratorie s) •• ·-.-·:' '_ • _ .4 .o.'~~.; o_: ·- -:· :· _ '_"' ·, _ ~. . ·. ": ' ' · · · - ell u~ho~~¡e!l{za~~r d~ ~idri~ylas células fueron disociadas a presión - suave. La suspensi6n dél~lai° ¡~(obtenida íué lavada en 60 volúmenes del mismo medio de cultivo Vlu ego estandarizada a 4 x LO 6 células tumorales por.mililitro con la ayuda.ele una cá'.nura cuenta glóbulos tipo Neubauer y - .· -.-.. usada inmediata;rient~.' ~a,~uspe~sión celular co~tiene mas.del 95% de cé- lulas yiables. segú~ d~t~~mi~ción. con las pruebas de exclusión de eosina 84 oreaccióllrn~ta.irá~isic:condiacetato de fluoresceina 85 • ( Fig. 2 ). ' : ·, ~·. _·,> '. .',-- ... - ..' . ' ·'' .; • ' . ., • · .. Hl~tolog(~. Una biopsia contig{ia a la efectuada para la obte11ciori:~~{,~éhtl~~. de tamaño representativo del tumor se fijÓ en formol al 10%~H'tÍe•'7~y·~rh<:esada parata tinción con hematoxilina y eosina. ·- ·- .-.::· , '- " :· ·--.: ~~::/· ( . ·.~--·:. ·. - . . . .< . .. para confi.r~~i.6~·~istopato1Ógica del diagnóstico y tinciÓn de Paragón • '<' ·, .• ,_.,., . ~ '\ . . • ( Fig. 3 ); •~. I·'i,~. 1. T1un,q· \'t:lll~l"l'i 1 • r;t;:f;n-.i:-:1bl1.· •. :~- nino traspl~1nLtdo en L'l :eji•lo s;ih,:ut.·Í: en la región l·osL:d dt•ri;cha dcspuc~s de 2 1ncscs de implantación, Fig. l. Sr~ ubscrvan Cl~lulas clt~I tumor de Stickcr en una cámara cuenta glc)bu­ los tipo Neubauer. Aumento 125 X. - 9 - lnmunofluorescencia. Las células tumorales de cinco perros tomadas al a.zar obtenidas como se mencionó antes, se incu- o -e . baron 30 min. a 37 c-onagffaC:iÓn~ócasion-a.l con-un suerocde conejo in-é- ~· .. -. . : - _. .- ' --·. - - .-- - ._ -- ,- - -- ·- __ , º--- '- - - - - - 0 activado anti-gama -globu1iria-~e ~~rr~ má rcado. con ¡~ ~t{()~{anato de fluore¿ _ -· - -;. o.-.- ,_ ,' <'; .-. -- _. , . -- - .: • . - ' .. - ' . •, ., ceína {Hyland)-en d_iludin\i:s {iuegg·!ueronla~idas tres vec~f> c-on un ~o- ;,-.-· lumen. tot~lcl~;6:0\.f~fes:~~;Jrie_;:·_./ ,,,. .> c~l~las.'iAf,~~ci~~f !d'.o~\~%~J:~·~~;~;ol'l~Jo y d~ perI'o no marcados.:, ·¿.;-. . " ,. ·,; - f'~· ~~\)/'~ . ,· >:::.· :, : Los leucocitos cáninos se . .. :::- '¡ .f~,'; 1 usarot1 Co~o t~~Úg~s eri)a_prÜeba C!e l:nicrocitotoxicidad mézcla:dós con - las ~~1ÜJ.~sct~~;¿~:sl~l-~~i;cl~s~a!tar en experimentos dupÜc:abs la pr~ - respectivaxnente. Para la obtencHín dé los. - .l.. eucocitos se utilizo - -_,, .. ' ' - . . . ' - - sangre venosa desfibrinada con perlas de vidrio y se siguió eLm~l:odo de: Tf llez Rubinstein 86 y • Se usaron tubos de ensayo de 10 x 751TlIIl: ~n los ~u~­ les se dispone un gradiente discontinuo: la capa iilíerior, de 2. nib d~~n~ ~~ : - - --__ ' - ·<_:·_._-.-:-:-_·;.)><~:_'.:·. . -.:;-;'-:'.~-:-~:. -~~~~$::~t~7~ : Fig. 3, Célnlas ncopl.:Ísicas :fol tum.or vcnereo transmisiblt' canino con tinciÓn de Parag,}n. Aumento -100 X. Fig. -t • Se observan linfocitos de perro en fortna sünilar a la figura z. Obsér­ vese la diferencia en fortna y t:a1nafío - con respecto a las células tu1noralcs, Aumento 125 X. - 10 - capa blanca en la interfase del gradiente, de donde se aspiran cori pipeta Pasteur.y son.posteriormente lavados en 60 volúmenes de medio de cultivo - . .- ' .. - en tub~s';~is~~rde plástico de 1 rill. a 1, 500 g. durante dos min~tos~. Ú sus~en~16ri:~~1Ui~:{~e ajusta a una concentración de cuatro miuc>n~sde leu- cocitb~ ~~~-~: •.·~-~li'¿~ri~ou~ ...- cáma'ra.cueht~-g~'óbulos •• tipo_.N~\lbauer • .·· . P~ti~b~-d~--Mi~rocitotoxicidad '-~·--:::·: -·,:- ;',_·' ...- .. __· 5·_. -~:- : '. :'. _·- .- . -. :_ - . . ·: .. - ' .,_, 2~ ~·riipleÓ el procedimient1:igene_rald~ la técnica -~-~-º6~;aÚ~;lasprJ~bil-l_•:l~il;:1~;~ci~,'¡>1~~tl:~~:.~~-:6~-~~d~va~i·o~es para _. . - : : ·~' ,,- ·- con 6. pozos .de prueba cada una y en•ia8,~ua'le~)o~ r~~ctivos correspondie!!_ tes a cada hilera se detallan e~ l:;~¿~la.';,~~~-1~- Zos·l~u~ocitos fueron - tedidos enseguida con eosina aIÍlarill~.:I1·;¿¡uciÓnacuosa al 53 p/-.· y fijados con formol amortiguado al 3~%';~ p,l{ J~ 7~~Íinéll~ente, cubiertos con un - - -·-.·: _.- . :'.->."·.:,,.- '., portaobjetos para observación de los resultados. en un microscopio inver"." tido con contraste,de fases UPI de Zeiss. cLas células neoplásicas son fá. . _, .-_. cilme~te distinguibles de los linfocitos norma_les cuando se' les' empleó ju.n-:- tos en las pruebas de microcitotoxicidad. 'l'ABLA 1 • t Realización de la prueba de núcrocitot.axi.cidad en dos etapas, en la cua.l los reactivos se agregan en orden de izquierda a derecha en los volú:rnenes can - tidad y por perÍodos de incubación mencionados. . ( Primera etapa o Segunda etapa o Tincion .Fijacion '· Hileras incubación 30 1 a 37 e incubación 60' a 37 e Z' 51 l µl. 1 µl. 5 pi .2 ,ul Spl 1 MC CT SPN E F z MC CT SPT E F 3 MC CT se E F 4 SPN CT SPN E F .5 SPN CT SPT E F 6 SPN CT se E F 7 SPT CT SPN E F··. . 8 SPT CT SPT E F. 9 SPT CT se E F·· \'·· 10 SPT CT se . i E F L 1 · MC: Medio de cultivo (Me Coys Sa} { SPN: Suero de perro normal SPT: Suero de perro con t\lmor de Sticker 1 CT: Células tumorales .2000/, ul en MC SC: Suero de conejo (fresco} se i Suero de coíiejo inactivado a 56°C 30 mi:o. E: Eosina amarilla al So/a en H.2 O F: Formol al 30"/o Amortiguado a pH7 p/v La prueba se realiza en charolas de plástico para micropruebas de 60 excavaciones de Falcon Plas­ tics, 30~. Cada hilera de prueba se efectúa por e extuplicado. l ,ul • mm3 Hileras de Prueba, ... ~, ,--- - , ·, -: .. - Hilera No• l (Mcc.f C:i>~:;.SJ?N) : · · · ;: .__ '_ -.~ :·,.~·: :,-·.,~~;'.·:.'~//~:,~~:~~ >~<~-:·:;:-::~.·~·;·'.:~~·-~;>\:')j~~~i>.:~-:-.~~:;':·-:i>><:':'.~ :_·:.-''· '.·. :> ..' '. _/. ;~: ~;. . _· >_>~·: ·; , :~- . , la.·.re~1~t.,~l)C~f:~~.t.r.a,~at~sgi() .• ~t?can1~() .y·.osrnohco .durante la obtenc1on. ~i'é (/U:,\( .;• ''.R~'tesul~ad~ ~~sitl~o Ín'/alida la interpretación de t~~~\~i~'~U~,'~ii:1.~~~cl~:·~iipllnt~:devisÚ ~nr?lun()lógko, a menos que los re­ s5tltidti~;e1ri:ias\~éias ~:¿~'.~~'ccient'~~ dÜier~n c:ri exceso a los de. ésta,. ·:~<~~~::-;~- _::~~i ~v.' -~\ :~:~:~i":;;=;~·:·····.·.~:.r~!----- <." "":):~··Y·---- --~~ ~pl~-i--· _ ;". . Hilera J-lq._ 2( Me f. .. ;ri. fe~ult~dopositÍ~o ¡ en éstá, podr(a interpretar- 1 l munoló¡iiJo, Í~ c\i~{p~~de a8.ararsepor comparaci6n ·co~ la hilera anterior, I · envi~ta ¿~\ll~-~~~'ijiai~~ r~aliza prcporcionando como fuente ?e comple­ mento,el~(~;J~ef:~¿r~~normales, En caso de resultar negativa en la .hi~ lera 1y2Jp~~-d~.~~lls~T'~c que. sobre las células malignas o en el .suero del pacienteri~ :~~~e~~~ti~Uerpo~' citotó,_icos semejantes a los que efectuar(an una reaéd~n d~ ~e¿hai~\;or ~ctivaciÓil del complemento a~tólogo o alogéoico. - 12. Hilera No. 3 (MC ~ CT ./- SC} Esta e11 wia-prue&a~disefürdaparaP,1~si"ias ·~xj,~te~ 3.n~gen_osy anticuerpos c:itotÓxicos .que s o.I1 Íactibiés·"a~"E>~D:~j.'¡;¡ri:~:~~ii~Jdüo~Ó~''~l· uso dé complemento heterogénico, .-~ e,; ~,~.:-,~; --:;-:;o,;., c~o,~s~,~~{:~~~j'~}.:~;;g~'f~·¡¡~~ci§'~p-~Írtvo es afirmativo en este sentido; si ídi1~s:hil~'r'a8if)i-'i~1'6~ r~:~:ftad~s li;lil s'Í.do negativos y en ésta positivos, ;·r:>~; .;> . , i?cliC:~ qU.~;íos'.a'.D#cti,~rpos pfod~~idos, po~ el· paciente no tienen capacidad de'·;i.c:~~¡f,'.~'sls~§a:~log~Ilico ni el autÓlogo y por lo tanto, pueden consi­ - · dc~~:~s./si~~fecfocitotÓxico in vivo, posiblemente del tipo de facilitación mrri~oli~c~. - ' «',·,·,·e,•-;,,-·:·;.':.-, . Hil~fa Nci~ 4 (SPN ~- CT .¡. SPN): ' . . ' Es üna prueba te~tigo negativo de viabilidad celu-. ·lar se.tI1;eJaII1:e a la hilera nÚmero uno. Un resultado negativo indica una hue­ t1aV-Í.abilidad celular, as( como la ausencia de anticuerpos sobre la superfi.- - cie-de la célula maligna o que, si están presentes, son incapaces de activar el sistema del complemento alogénico. Un resultado positivo en esta prueba, ·es llna indicaci~n clara de que las células malignas han sido forradas con - anticuerpos capaces de activar el complem.ento alogénico. Otra interpreta- ciÓri. se.ría en el sentido de que en el suero normal existen anticuerpos.y. c~ • '• • ' - ' ' ' '. ';• .~ •' -' ·' • ' : • e : .' • , \- pl eme ntc:i c¡ue sof:[.cito~{dicos para las células malignas. circ:ulant~s· · ·,.- ... ''• . ., •..••• ·<·,- Hil.eia N~~.s:;(si}~f;t. CT< ./-SPT) : : ··~ ~ '. ·, :._ '. ··.,· , ' ;·:: ' ' " \,;~· .,,:\:> En esta prueba se·trata;~,!!.-.~~·;~~~fl:~~{ji;·c~l.ttl,as tieopii~~'~;~,hlii'~ido cubiertas in vivo pór'anrlc~~~~~;J~l;'.~~~f~~{~; ~Úéstos ... ·- ... ,,, ··' · ... ·.,¡_ -·D - .ce Hilera No. 6 (SPN 1- CT ··~ se) ~::r~~l~~!i~~Qjj.~~1~~s.J~1~~"~~1.1~~R~2,1·.~·."i .. '-f_:;(':~' \V i'.-\,/'' ,.~.:'.·';: . aq\l~i{~ ~~.r?cb?:~:;~'.:~~ér~~sia.i1~~~~··· ~quí'la·p~~eba s~ 'r.~g;.i~ c()l()~aruio - ·>:··-.; ·:. . ~,-.-~:-,:<··~-~-·::_;\:.->'.'.~~'.~~~~;<~~?-.::~~L::·:-?,'.-<<(. ·--'·<-.. -·_ .;__ _· ~ - ·:,, ·,. :. .. '.::.'·:'.<: .. · :· las•celulascen UIÍ'medió·coloido-osmotico·mas·· ftsiOlÓgko. '· -··-~<-\:; ;.·;-~f;~:-~.::·.;.-.~.:-~··'.~.;~-.~.~r.~~::. \''.\'-.\}./ -· - - '·-. >¡.:t/:"' HÚer~ N~;·{1 (SPT1f,4 i 'CT .·f:····• SPN} . : . -~-·, "')::~; ::,·-:.~:,·:· )_{~~;;_:-r2;\/:- :>\i,: 1 7': f. '· \; <· ' :~~r medio ,de e~;a pijie~a s~ t~ata d~ I' investigar ,:>"• :::';;):.· .. G ?~~~'e'ri~iii;~'e-c~iitifa'~tj;.ci's ~I!. é1 ~~ér~d~i~p~Úe.hi:·e• c/umd~s···a·1a·· célula tn J. ,. · ·: (;.-; .--· :·:-~ '.¡:.~-!i~\.~.oiti~~~'.-:~.:-: .~-.-~/;~~'.'"~:::·,~-~~:~'.;:.::~'.~~'~'.~-~):~~i:C:,'~'. '.~:_/:~_: «·-·-:;_.;-: ,' . _::~\'.' ··'{; L'.~-~-.-~-.<~~~-~'..~. .· ·<"' : -.. -. ·, .-_ .- _. _.: ti 1 ·vivo e inv:itr() que;s.ean'C::ápáces.deactiva.r~eL;c'.ornplemento·alogenico, en ·- 1 ·Hi1e~~ N'.L'.!f.·}~fi"';t.),#:*)?;··· . ... ... . ~;~oWie-:' ~./;· .''. -:;-· -'<.-.::· :· <¡,,;;_:, es te• casó se~gbt~M.r~;cll;ll; resu1t;i.do p(),si~1.Jº• ·.·• Hilorá.Ni. f(;i.:•;;:;+c{~c)C,• }c'E t;C .,. ; :/;;;;•< ;<;!.' '.;:·~:~~¿di~·~~ ésta se trata de averiguar la pres en e\_'-'¡·,.•, - cia'd~¡·nticd~;~ás ~~·~1;,~u~~·i}~~(~K~i~hte ~riiclos a la célula maligna en - cotldiciones ~e satu·r~ció~ cap~~~~·d~· a~tivar el sistema del complemento - heterÓlogo, en cuyo caso se obtendrla un resultado positivo; sin embargo, si éste resulta inferior a los obtenidos en las hileras 3 y 6, indica:rla un BUU.\OTI.U r~ ~~ !L ~ Me - 14.- efecto anticómplementario en el. suero de.l paciente. El resultado positivo '; --~, ::::-- >,'.:_,'.~!- ~:/}::~~---:,. , Hilera. No~-;íotsI>'J:-~~·~ci~i;'*l):'~ .. : ·.. . :'.;!·,; . - - :~.'~_ _ '_ _ ,_ _ ,: -" . •·.··~ SUn~ ;l'\1~~ i~~~f~ ?'.:e~i~.~~.i;,qw~~P:~rttlÍttl COI!.0 • cer si el eféé~o dtotóxico del suero de 'c:611~J§)1·~,!~~~~f.3:J~.J~~·!.~E{~;;~~Icoh.f plemento, para lo cual éste es inactivad~.c~~·~~·~·~·iy~~?~í~~· ~:p~r ca)~~::: ' ;.: .. ,_,,,.,' _., .;; - •¡; ' e> •• ,_' ••• tamiento a 56 o e durante 30 minutos. . '<' i"' : l:>·.:·t:·· ., ! ~.:·;:· Las lecturas ;,f~~'.ey]~~s'. ~'ri'1~;·~ei~jc)~g~'.q~~• . •••··· -;,,~~·' . - .,"' ,--~: .°'>/ " constituyen cada una de la.s hileras, fu~~9~:j;'rtiJri~4i~O:íi~· ~.if~~·~r'.Jri;~~s~~} ~ --: ---~>-. "' .,-·-·:·-¡"'"•'"<,-·· ,.,.,,,,"·, ... - .;_.,.,_ ....... -~ ·"" ·--··. ¡,•-~•"' .•. •, ,-. tado. de viabiliga~ c,elular · có7~~~?;~~~;Hi~·J~~i,~?P~.~~f;·j~~~~z~~~~'~"~~:t~~1~.~·- ·.···· ·.· ;, '· ·:. ,·,·-.· :· _- ---.:¿(:-~·;.:·. ?-~ lera. - '~"! • • ,-'.~"~:.-:,;Ji;~~-~\'<"••;• :,~::~. .~ ~~-~:~~: /;·_-~ .) _-, ~-• •'·'r- • • ---,-.,;.~.,·-_·.'._<. •,. r:":~i' •'-~·';.<:,e"·:.~~·· ... ~:.·,> __: _• ~-:.~:- <"0' • ;'~':.-+··,_- ::"' .:~•/ ·<.:; ·;-;°.'' ";~:- ·•· " ~··:e_:: - ' ., _: }:fr >.'.t.a.:·~~~.iliclª'ci .ce,fu1~r~ 'Rutiqe'r.epi:~se.nta.rse en ... •! unciCS~·. d~-l .~Íl~~~:~~~j~/d~%giül;i-¡~~~~·t~i~~:bf¡~:jii~ftºiEdd;.§~~:~1i~ a;~L-_ ·~-~ ,,_., ., ' :~:·. ':ij: "". ,-,> ·. .· : _;,., 0 0 :::·.:·,:::::·:·:.~~:f.~ddt·{/~~?k~~~~i~iatir~Ji-~fi~ i@~i;i·.jt s..•..._.e• .:_..i• .~ •..:.. e:.·.,:. ,...~••-. ,.f:.i ._•'.. • .•. ·r•.·_'..·.e ··..:~ ···~da.-·ms·······-··'ª·······-º··n;.p·· 0 .•·.'•d. :r.:.· ,_e• ·.•.·:.·.º ::· ··r.·•·. ·ª:_•·.: otros y en la cual los resultados :<__~'~- ;,>~"~ , --. !. : -·· ;._-~ ·~-~ :·:.~>:i>·, . . f.,,; siguiente manera : ~. ~:~·::.~;·: ::~~;·,>· 1 : Resultado negativo, · con 110 ~~{J~'(~:~ 5'.\J~, ·~~ .''·:.::·:·-:·::·-·. 2 : Resultado negativo, con no xfuí;':\·'<~·:·_.;· .. /"." interpretación respecti~a,-::: •.•. como: liigu~ : ; -· - ~··'~-- l-l,..l-l-l-l-l-1-1-1 .. ';~· ·'.r~tai.:fn~nte negativo, no existen células malignas ':. ::..: : ·.·~ ":-: ; --~" , ' . . ' circul;uites"o:· s};j~~~~n:~ el p~ciente ha dejado de formar anticuerpos con- tra ~ll~s ~·;~',ci~i:v:~Il;ado un estado de tolerancia inmunológica hacia los .A.~::;,; ;,·:;<;>'.' '·:·:::.;,:;:·/'.;; '•\:·;_"'.~:·,·;e;'• Resultado positivo que indica que en el suero del paciente existen anticuerpos citotÓXicos capaces de activar el sistema del complemento autÓlogo y hct~rÓlogo, por lo cual podr(a suponerse en estos - casos u.na mezcla de mecanismo inmunológico de rechazo }' de facilitación hacia la neoplasia, con predominio de esta Última. - 16 ;o Resultado.posÍ.tivo por medio del cual se aprecia que la viabilidad.celular ha ~ido\aíec~~a.porque•las células. malignas. se encuentran forradas de anticu~rpC)S ~i~~c,'es}de activar el sistema del - ," ·.. .; :·---" .. · ,. ',..,. -·=:··~-'. . . . . .' estas dos disyuntivas puede ser de rriu~iiJ:J~hidadla inves~igáción d~ an- ticue;pos .citotÓxicos unidos a la riie~~~~c~~~~~;&~?,'por.~é~rdc¿de ··i~unolluoresccncia, en cspecial'c~~eiSl.a~·~é~;~eio d~cJ~!J~·~a.r~a~ el.o. éon· isotiocianato ·de fluores cei'n;'~riü~i~6'.l¡lliil'á~ •< -"·.·:/<',; >'':-/ - ;·, .. :, _. ';'.,'--- ··-- :/ .. ,,_._'.._ -_·.'·; ..' .._o:" .· .. ·.4-41-4~i4-4-4-Z Resultado delcual no se pueden obte:O.~r con­ clusiones de tipo imnunolÓgico posiblemente debido a t~cnica de obten• ciÓn defectuosa de las células. Lo mi o;¡mo s.e puede aplicar a resUl.- tados como . ' 6-6-6-6-6-6-6•6,.6'-6 y 8-8-8-8-8-8.;.8-8-8-8 Los .resultados de la prueba de microcitotoxi- cidad con las células disociadas del tumor de Sticker practicadas en los casos estudiados de ambos sexos con tum.ores espontáneos y trasplanta• dos, practicadas tres veces.en cada caso con intervalo de un mes en cada . _· . ' . .' ·-,'": - - : <·. - uno de ellos se repo:.ta.n ilÍinpleml:nte .como positivas o negativas para - .-···:::':·.:: .. -~- --.-------~--- --=,;--=.=-~-:-:-;- ·,~:==-~~~~~-~~-Á~T,'.~~~O--',,°iº-:;'~--:-;.c·-.~----'--=--=-- ~-o_--'----~- _---= -- __ - _ losfi.nes:de eyaluac1on s.egunse·muestra en la tabla 2 en el capítulo de - .-- -• - -- - ; -' - - -· ·, . ~-,'.-.-'¡::.-•;.-~• cO- . - •- - - • e ' 1000000 2000000 3000000 4000000 s0G ©©G© 600©©©© 7@© ©©©© e©0©©0© 9©© 0©0© 10000000 A B C O E F CHAROLA FALCON,Ct. Nº3034 (7Bx53mm) "-'··,-.---.-',,,,_, ... - 18 - RESULTADOS En la realización del presente trab~jo pudo ob- servarse que el twnor de Sticker está constitUÍdo histológicamente por - una· población.celular sostenida por un tejido conjuntivo de baja -~e~s~<ÍcJ.d lo c1.lal permite la fácil disociación de ¡as células c~ri Wl ti3.uzhi1:Ís~~ fri~~ cánic~ mínimo lográndose obtener suspensione~ celul~j¡~.~J~t-~:·~~~*~~aje de mortalidad inferior al 5%. Las células se ob~~rie=-~~~~x~~~ e~fr~.; sí yal observarse al microscoPio de contrasted~.f¡skp~_e~~nÚI1Wiafo~xna "." ',<':-':· . ,· esférica con bordes ligeramente irregulares, d~ io a-14u -~é·r~~ d¿:Ji¡~ ·· j ... .', --.-':i, i',,:. metro con un núcleo esférico rnucl.eo16'?iomih~n1:·e··y eri,~1 ~iit0};1~.sirii/8{ .. • • • ""• ' • " • ,•, • ; , • ' • -, ' - ' ·~ •:: :·:: - •• • >'" • ' ' • 'r '<, :, ;,; observan cuerpos ·ref~{l&'~~e11 ~#·~~;r1~'-.ci~ -~.K'.3;~~e';I>_~}e~.e~:c:~?~~~~~ti-_ ' der a mito.co~Í'Ía.·.·. s~.+·· .·.- ':>· •::::~(:' - ''"''- ----~ú' ''•' ·<•'· "'· it'."'-· ·• · - '-"-://:··~> -~ .. -·.={~\:> ·-':..1;' ' ·;._-,,i·,~-> - ->~-'/<:¡:, ! ;· ~. º"~'.;\• ••• ,~• •• ;·.;1·tt~0·~2~~{~J¡~~~i~~~~-~l··· se en~Uentren·~n· el·m.ecii.~•de cÜ1Üvo,11fu t~Ml'(_fi~~·.)) '.~:~~aj.~q~ ~,~'~c.; ·la.prueb~~-~-,~~0s7')~-t··-é --·· ··­ ú1';·f~ícili:s iU~i~1~~d~- ~in2~pe~~º~·ql1e - • :·,o-, .. ·; _·' "><• .'·>.>:~"'.;-',-:; ., ·-., -f"'·:-\,;: - '.:.:·_ :.·.:,( . ~;._':: - '· .,,,.: .. ( -. :. ·:.:'': •': do con•1sohpcianato de fltioresceina,. mo~i:raron una fluorescencia espe- • ' '.-'~--'.• r ·,~/_t:~.~:J;./~A- :-~·: ~\.~'."•"''"'• '.·' /_ ~~;~~~\~'.~-~-:, :~- '•, ' ;• , ,' 0', ,' c(fi¿~ í>k~{ti*~,:~~rii~'iiJ}ui·~:s~br~ ei~itoplasma. :>.:.:;~·. :'··"· -:·.---~:'. ----· : >-'.;A·:· .·~:' , . •.·.,; ''.< ''.:·{\ La:·.;_diciÓn de leucocitos caninos mezclados con '.• ¿é11liii'~ t~o'~~Í~s ~n 1.i:prueb~ .de inicr~citotoxicidad, permitió ·descart.ar --;:·· - ~ ~ontl:a¿la~~~l~~~-~'órrri~1~~'d~:!Ós perro~;., r.a: pr~eba de mic rocitotoxici.;, ·-~\j;~ '· -' :•; . da'dha'sid~'co~¿~a~riéÜ \líliJ'p'rueba. rep'fociucibte:para la investigación de' - . - - ..- ',·,' : tr~b~jo se pudo obsénrar r~peH~~ertte el. r~sultado positivo de· l~·~i~rrra; :. . . ,:: -_.··, . ·. __.... ._ >:;:>·;:.:·,:<<<-<.·_::_.--. .:..":"'·_:,:·:--.-'-- .,·---. -. . - ... _: .. ·>_-~. _. .._ -;·~_\.·_.:.~:,_T>-:: __ >. cuan.do..s e emplea comofuente·d. e.co~p.- le?ll~rÍto-el su.ero.frese() d~ é_o . , - ·- . - --- ---.- ---~. - - ,,,._ - '_.- ·- - .' - -- - - - ·- " .. ~- .n.-~fo.·,.· - - - ; - y re sulta_dos totalmente neg~Úv~s_.'Jilii.nd()la fuente de ··complement<"Í eii·1¡1 reacción son el suero de M~ci1:f(~Fs~:ero de perro con turl'lor de Sticker o cacia del complemerÍto•dep~r:i9s qÜe~.hübÍ.é°r~n sanado espontáneamente - . :- ;.- ·.- ;·¡_.~ - ._. '-::- :·._ .":'.~-'-.:,· ...> ''.:'-', :.-,:""« -. : _-.- - '.' ... ; - ,. . :, ; ' ,. ,_ .: .. :·' .'.'..";_"_ ',,: ·:·;,···::' -,, '.: .:~ :-.· :' .:::;·. _: ··'.,:: ' "'·:. :·· ':· : , . , . del padecimierrt:o, ,en,Virtud:~e,q?ttÍ elp~r(o~o.de tiempo en que se realizó este trabaj6, nirt'~riti~: d~ í6s c.. ~~o~ pre~et1tó ~eg,resiÓn espontánea del tumor, ' . . . -_. - .. , .. -- •-20-- De acuerdo_ con lo expresado en el. capítulo de material y_ métodos; -la prueba s~ corisid~~6 positiva cuando más del 80% :. ·; .',_.,·_.:_'::·--_:-.:~.-::.;<-··. ,_::_._ -,.,_------.;:-.' __- .·-·;,··:_'.··.<::·-·-:·<<:·;·:,-_º•'--·-··,·, •-' -, . ',' ·-·-. # de las.celulastU:morales aparec1an muertasal finá.lde la reaccion y nega- ·_- . <-..:-..::.· .... _·:. :.···:·:·_~;::· -.... ·::: ;<_"; ' . , . . ;_.•-:.'·.>·:::::~ ::-.:. _'._;-.: __ .- ¡', :'. - ... __ ·,._ - ' .. - ' ·, • ' . • ,, tiva cu¡¡.n4~-N51top~r~~ntáje no exced1a del 5%, siempre y cuando las pru!_ bas testigt{q~~'eri f1Úrnero de siete que se realizaron por cada prueba ase­ ~u~~r:r/{~i:@~~~'.~~ilid~d de la prueba. Los resultados obtenidos se mues - tra;· ~n,'ia'_;g~~:iQE - ·. -_;,. ;.; En cuatro casos, la: suspensióri 'de células del ...- -.·.,r;·•··d ,:;".-,.- ·· ·. . ·· ·. tumor:de Sticker fueron obtenidas por procedimierito~ ~~~P~¿os.V¿o:n~er:. <. •V :.idos e~ medio. de cultivo McC oy Sa por cine o dÍc-is /JÜ~Í~~,I·~~~t>i~·~~~ la.técnica ele microcitotoxicidad, obteniéndose ·re;lltaa~~ ~J~~1i~~;éfo cu;il• - ~. ~~-,~-, nos hace pensa:r que la positividad de la prueba se pie,f~~.~1·.~~~;.a:~~~Ae ·,-._~~>'·i.; ··;;i,·s~ -=·-~- la membrana celular los anticuerpos unidos a ella, c~rno ~~ ful d¡;rri()ll~fado en otras neoplasias 39. - 2.1 - D!SCUSION Y CONCLUSION Los• resulta:d~s ciel presente trabajo nos per­ miten pensar que las c~ulas neciplási~all d~ltumord.e Sticker: s,on pdrta­ doras .de ANE, en respuesta de los cuale~ s~ 'prOducen en elahlmal. anti'... cuerpos demostrables claramente por la prueba de microtoxicidad'j por la técnica de inmunofluorescencia. Dichos anticuerpos c:itotÓxicoe en forma caractedstica no fijan complemento autÓlogo ni alogénicoí por lo ·cual puede considerase que no ejercen efecto citotÓxico in vi~o y por lo • ' .· ' .. :_ -,:_; :· '.· :····:·· ' ~--... , .. tanto. no partlcip~n en una reacción inmunológica de iechazo·hicia'la's cé- · . lulas maiig~s )'que pueden considerarse detipode facilif¡ci,Gn~uno­ lÓgica; c~mo;lbs q\le s-e han demostrado en otras 'neáplasias experimenta- , les 8~~?~]~\:rn:~tll¡b~r inchÚdo. los. testigos. adeéuados en ta reali~~cí~n ·,:-'"'-,".,__,~·-: :'.:-;; - de e~t¡Sp.rii~¡;~J::~ ~~?articular por. e!erD.l>i~o de. s.uero d.. · e co~jo·ka. cti- . : ' - '. ; .-· ~. , .. ,, ;; . :: ¡ ~:. ; t :: :· _,,, • ,- ·,' • " ' • • - •• • • • - • • • ' ' • ' • -· • • : ; ¡ . • : • - - ' ,y~cfup~~.'~~l~~#.ieritC>~y/ó:,EJ?'J:Apuede pensarse qlÍ.e eleí~cto de.suero ·.·.~~ c·~~j~·~()br~;·l~~ c~~as~·.~·~1~s ·~··~. depen~iente ,dei .si~tellm.'del com- plemento. Sin embargo, el suero de conejo fresco no muestra. e!ecto cito* tóxico sobre las células del twnor de Stíckér conserva.das en medio de .. cultivo durante cinco cü'as, lapso que se co~idera suficiente 39 para • que la.a célula.a malignas pierdan los anticuerpos citotÓXicos unidos a " ellas. En ba.se de estos resulta.dos puede ra.zonablemente deducirse que el sistema de complemento de conejo es activado por anticuerpos umdos. a las células malignas y cuyo papel ~ tal vez pueda comprenderse me­ jor en base de los mecanismos inmunológicos que ocurren entl"e la11 célu­ las tumorales y el organismo portador que se menciona.na c~ciÓn: TABLA 2. ,Resultados de las pruebas de microcitotoxicidad con células disociadás de fumor · de Sticker de perros de ambos sexos con tumores espontá'.neos (E) y tranaplan - tados (T). Caso Sexo Tumor Trasplante Resultado de las pruebas de mi­ No. E Ó T tomado del crocitotox:icidad realizadas en - caso No. cada caso cada mes Macho E Positivo Macho Positivo 3 Macho Positivo 4 Positivo 5 6 Positivo 7 Positivo 8 Positivo 9 Positivo 10 Positivo 11 Positivo 12.- Macho Positivo 13 Macho Positivo 14 Macho Positivo 15 Positivo 16 Macho Positivo 17 Hembra. Positivo - 22 - Mecanismos de interacción inmunológicos entre las células malignas v el organismo portador Cuando aparece en el individuo u.na.clona de células malignas, ésta puede no conducir necesarii~en~~ á.~ d~sa.rrÓÚo ''•< de una neoplasia y, de.hecho, ser.a~o;tag~~~.1~'~>:i~J(;~i'i~; ~e6izri~;. mos inmunológicos .básicos··:· ·)~{\,>i'· >.· ··. .· l. - Inhibidó~ alog enica 9s~9fqu~ es la autoinhlbición celular intrínseca de la proliferación, qU.e se presenta cuando un grupo minoritario de células protadoras de anti'genos se encuentra en un medio de constitución antigénica difei-ente~ 2. - Vigilancia inmunolÓgic<;i 9S-lOl , que es la de~tr\lcciórld~. - las células malignas por las respues~s li~~f~f~ cW~.:· lar o mixta del organismo. cuando el portador. de la misma presenta u~ esta.Jc.i;a~i.~,'.~~~~ii~~ti:illl'ti~ne, . ' , .- ... ·. ::,' ..· r .~· ""; ,"'..'~.: ·; ., _··:: '· ·;-: .......; ;, ·- ~ -·--!º, .- .. : · :· . . • - de. respuesta. débil o ineficaz para llevar á. c~b~'.er.·~¡¡@~1~.~~·l~~·~~l~las ~- •; ~,, :.:_.· malignas, lo cual sucede en las siguientes dr.c~~~~~#Ci~~~ a} Tolerancia inmunológica, q11e.~s ¡;i, iri.hi'l>i2t6n'tot~l}'e6- ·· ... ,': •, _:_:_.;". .: . :,,. ,;: .:·_,.·,<;;, ', - ·,. pecÍfica de la respuesta inmune celula~i~ül"n.~t~i~~~g~ - . - .. :,e·.-:," - '-- .. ·.- . ~ ... . ; ·-.- ::-"_' ':-__ :: :·:~·:·~<:·,_.:~:.:~~<-·.·-.:~~'. _- ~-__> <-'./ - o mas antigenos: como en aquellos casos enq~e,f!X!>e~~n,". talmente se induce estado de tolerancia neonatál:alolÍ - antígenos de transplante neoplásicos lO:Z. b} Estado de inmunodeficiencia, de diversa etiol~gía, los cuales ae acompañan de una mayor frecuencia de apari- c1. o, n d e neop l ae1. as 101 • InrnunodepresiÓn iatrogénica - - 23 - (ó teI"a~ll~~~) 1"ºc1e~cual puede citarse como ejemplo el elevado porcentaje de tumores en pacientes someti­ dos ¡;:tratamiento irununosupresor por trasplante re - mtl 103 c) Enfermedad alogénica crónica, que se presenta en - aquellos modelos experimentales ~!l tos cuales el orga­ nismo inmunolÓgicamente:~ole#a'ni~ d~ ~n ~nimal es in.; capaz de rechazar,u4 §~·~Í~cfón'li.~~iciea exógena y, a su vez, e~, ata~~~c/,1#~61§~i~~~en€t~ por i~ta ~n. - roríria c~c5.tÍiá~·}~.~~iót~''.t'.>c· ... d) ·. Me~a.tll~iri~di~~~~ilit~fióX[i.~U:~ó{6gÚ:il. (Enhancément),. de respue~t~ i~µile''predontlnantemente·· humoral CQntra ·1~·~e;las¿;t~;: ~iúpo de anticuerpos producidc>'s -~~IÍ· incapac~scj~JÍeva~ a.cabo la destrucción delas cR~~~ > ~lig1l:~~~p~·~re~~r de la propiedad de activar~(~¡~:· teIJ1a del'cdrit~iemento autÓlogo y al enmascarar• de liste . .· ttl~~li·s~siti()~ antigéniccs de las célul"s neoplásicas,. evit~:~ue lbs linfocitos ejerzan su efecto ci.toci'dico - direct'o sobre' la. neoplasia, produciéndose inclusive un a\lIIlento en el i'ndice mitÓsico de la misma., lo cual - puede contribuir a· la supervivencia, crecimiento y di;. seminación de la neoplasia SS-94 - 24 ~ 1º8 Báshford denomino desde J908 Estado de _-,. _ ..- ,_._. '·_-: .. -.. ·-.-:·._-- .-·-·., - Iruriunidad. Concomitante a lil. resp~~sta hlffiune ci~(~rE:anisrri';J p~rtador • · · · · · - ·:: -.- : -~ ·'. :. ·: · ,:- _ .~.-: -. ~-?- ;:. ":- -=-, -- - .-7 c ·"'; "- • - _ de una neoplasia contra ella, clÜra.nte elt.ierl:ipo q\le la, p~d~~~E:'"Ésta re­ 109 . sulta comúnmente ineficu·e. n la erradicacióf1. ~. ~__ ..' ,. U !Tl~~z;- ' . ~~' ~. ;~ - ·. . ·. . · <·· .. · .· .. >\ .·.' >'·· /.;i ifo· m y contra un segundo inÓculo de células de la' misma; clase ' • Ha_! ta 1969, laeviden~iaque sete~(adel~eJCÍ~~~ciadee~t~ !en~menohab(a i1~~~113 sido escasa ·iy, n~ás :·, <.:!--,~ ·, '..: _''_ <· ···'_· '-.,: :' :·_ -~.'-- en un e~ta~o de tolerancia. · Si la neoplasia: es extirpada, el portador quedac'on'u?ia: iiirnunid¡d efectiva de larga duración que impide el pren­ . dinÜ~Jt~··de~o segundo inÓculo de células malignas·delmilllllo tipo y i i >' . . . . . . . ·. .,· '>'. lÍl que Fisher en 1970 denominó Inmu~dad Sineconcomitante> , En - -·-··------'. . ''.' ' iá~:c~sos de leucemias humanas parece éxÍstir; ·po~.1a'c~;~~~nct~·d.~ . anticuerposanti-ANE, un.estado dé.inmunidad c:o~Co~~~t~.· !:'.~ >•' La toleranda, o sea la á.llsencia·,de ré~pu~st~ . . me~talme~te : En las leucemias y sarcomas murinos, inducidos por ía . ·-' . :· .· - . ' ' . : in!ecdÓri viráren el perí'odo neonatal, los animales que antes se consi- .··. deraban ''tolerantes" forman complejos irununes ant(geno-anticuerpo so- .. • 114 lubles, que se depositan en los glomerulc,s y que contienen lgM ·Experimentalmente se ha observado que .• si él; anticuerpo que se produce contra las células neoplásicas es capaz de a.~~ .:·: tivar el sistema del complemento, éstas s.on destru(das in iit.fci·.~}·~'..~ '< in vivo y pueden eliminar los implantes tiimoral~s por uri n1.~c~rii&rr1ó'~ - -- -· -·.:....·'--~--··. ~>(- ;.-::,¿·, ... ··~·~.·:·'F~~·.{-·~"·:. de rechazo semejante al que ()cu~e''t:ci~t~a los'tra~plant~s det~jidos nor- ll5 males , .por un posible siilergismo entre la reacción hun'l.oral y - En algunas neoplasias humili'a.lt1a''eXisten• cía de una buena respuesta inmune humoral guar~~ ;exri~~c~~Ja - maligno U? Por el contrario, en, elco~io~~78fh§~ie obsel"\'a que ., . - malignas 118 La inmunidad -en las leticemiAl.s muriria.s puede tra.ns - . mitirse pasiva.mente con suero, como lo demostraron Gor~r y A.Inos· eri 119 1956 Por lo que toca al !enc5meno de fa~il.ita~ión; • • '·'_¡r•º"• • .. ésta no depende de la resistencia de las célúlas necplásic~s·al·a~'.{ ciuerpo 'citotóxico sino más bien ll•que el a~ticuerp~ no tien~'1iJf~~c8 ·. dad de destruir la célula maligna eri··~~o·11~(j. ~ha sÚgeria~faJe eitu~ · mor es inaccesible a los ~ntic~er~¿:s·.itit9h1.f~~s q~e portanlos linf~i- aciesllacia.para:lograri~l:tifa'~'i¡~fgr~iiii1Íroero de células presentes en la~n~~i¡s~ios; ha quedado en la actualidad ex- présada de la siguiente manera: "El significado de los anticuerpos hu- morales que se revelan en la prueba. de citotOldcidad, en la posibl.e inmunoterapia. del cáncer, es diffcil de evaluar. Se consi.d~ra que los isoanticuerpos humorales juegan un escaso o ningún pa.pil en, e'l rechazo - 26 - _d~ i_~j~~tos de tejidos normales, a.sí como an otras respuestas especí- =------=-----=--- _--.--__- ficamente celulares tales como la lúperscnsibilidad celular retardada. 1º3 Lo mismo puede decirse de la relación de estos anticuerpos con las neo- plasias humanas, y, mayores dudas en relación con los anticuerpos cito- tóxicos en los mecanismos de regulación de crecimiento de las neopla- sías, han resultado de estudios realizados en la enfermedad de Burkitt, ---- en la cual se ha comprobado que los aoticuerpos no son espec(ficos de esta enfermedad y que puede hallársel. e.! J et .i. .e .l süero de individuos nor- " ' ·.~, , ' l?.l males Si bif!~ ro~:andcuerpos é:itotÓXicos parecen no g\lardar relación con el crecinllentr.d~ ~ares ya establecidos, se ha encontrado que no se requieren para evitar el de-sarrollo de tumores ex­ perimentales nacientes 122 Loa anticuerpos citotÓxicos por s{miemos, no alteran en las células los íenóm:enos de permeabilidad selectiv_a¡ constitución quÚni.ca ni propiedades metabólicas, y las células. conser~ van su morfología normal al observarlas en e! microscopio de contra.'st~ de fases, con el que las células viva& muestran una refringencia carac- ,, 123-124 tenstica • Por el contrario, la adhesión de los anticuerpos citotÓxicos a los linfocitos producen una transformación blast oide y . , • lZB respuesta nutogemca Los anticuerposcitotó:xicos producen; -bajo la acción del complemento;. au~ent~'.del ~iuml!P ~~ l~s. cé1ll1ás~on - ~;·.,- 1,i·· •';:"i ·. . ruptura o sin eila,. debidcS&ta:~1t.~'i;(?io~.~~\~·pe".~l?i~a'.bilidad de la membrana celular o de su metabolismo. La interferencia con los ¡iro- - . ce sos metabólicos ne ce sa.rios •para· el •runcionamiento dela botl"lba .de · sodfo, . da como resultado. la incapacidad de ~nte.n..e. ; la to~ocidad intr_!!: "',· .· ,··· ". ' celufa.r : a medida que el potasio se• escapa dela ~iiuia, hay ingreso ,. ·- ;" . - : "- '- -,- '·: ·- ; de mayores ca~tidades de sodio y água, c~ÍÍ ede~~ 'subsecuente y muerte 129-132 . . ·. . -. . ·_.··· ·. ...·. . . __ -_.·. . de la misma • La sensibilidad de las células a los anticuerp()!Í citotÓxicos se basa en el número y disposici'ón espad¡¡i de los a~i;:'.·-~-;:::~:~:_::·;~: .. ·::~~-;<~~~-- -' La nec~sid~d de lievar a é:ab~ in'1~:~Hgáéio- -nes que tiend~h a dilucidar en q\té consiste el reri6~~ll~c~e~"fJ~Jifk~i6i 135 inmunológica rué sei'ial~~ desde 1965por Kaliss • •Al par~~c:r, ".: ','•"" ·.' _, los anticuerpos citotóxicos que conduce_n al fenómeno de eacil.it~i:i~~<; inmunológica actúan por cubrimiento de los sitios antigénicos de_las células, evitando en esta !arma la sensibili_zación de los linfocitos)' consecuentemente que ejerzan s~ efeéto citopático sobre las células l36 bfanco De hecho, Hellstrom et al. han encontrado que el s_uero facilitador de los organismos receptores de tumores, puede anular el efe~to fohibitorip que sobre el crecimiento tumoral llevan a cabo los linfocit~s 137 inn.:unes y estos mismos autores ha..n comprobado que los Lin!oeitos del ganglio regional de ratones que te1Úan un tumor, ejercen efecto citopáticoin vitro contra las células neoplásicas: pero que éste era. ~uprimido con ~~ero delpi:>rtádor de la neoplasia, protección que se - 28 .. perd{a después .de poner en cont~cto el suero con las. células de tu - mores en~~reci1'Tli~nto l38 ,,e:.·_,•., ,'}',:.. ;;~IÍ.{r~'.s'.y ~ija~J~1t~~h ~n~~Íltf;d6 ~ue. lo.s · .. ;:~.:.:~~·:·~·· .·::.'·~~ - ª"'''"¡+~~ 'J. §~ji'~~,.~~;f~ ¡~\;m~~'.~i~t.:~,,~~t:,'J~¡,~;:.~f; ;{; -,fa C'' nofijad~res'·:ci-e cornplerne11to, : •' ;'·•.··,,•;mt;e11t;as:.que las.~q\le ' . ·,. •. ,,_ '•'· •. ' "•"' ~·-· ·;r. < '· -· ···- _,, . ',-;;:·· ··----' ·:.: .p l~m~~to.fuWibie>':;, ~~i~.~·¡E~~~:Hti{6~.if~~.i\~~:$1v,b·~1:?'.M?./: ·. ~ :·f :~()~ dos•. tipos d~ i~*:ii~~l~tuli~~~ difle r~ ~·· filriá~rii:~~~lth~nte eri · 16s ·1~ag~¡~tos Fc·,···qJ·~;s~~?~n··~os·~ce:•rad~ca •. la~l"6ti1~.~·~·:dl'··.·!~ja~···,c·~~~i~~en~o····. - ·... ..··.:_ ·-"·,; ·.·-:-.'.-.:e··-··_··. . ,· ...- . . -·. ,_--, l?nc o,nti:adó que Jos !Tli~rn?fa.nti~~~;pqs·~~e·;art¡cipan en Ja· reacción ·-'.- ·_ ., :-,;i- -· ~ -- --=-····-' d~ ra.cÜitaCfóri,si.~e'1~~.q~fta~~l;ír~·~i:ri~~1:9fC:~ que es el sitio de fija- •·•·. ·.•• .., .· >< ·. <•·-· >i41J·¡4:z, · E< ·) - ción de.-complementp . ·<· ' .••••... · .•. , < ·.··, ~;~ ~ .rie:;¡~~ a~l:i~ii~ipo~ iitotoxicos, ·los más ac ~ .' c;>·· .. ·•'>'··.r··... i43 .• tivos son los dÍrigidos contra~éiulas linfoides . Los a~iicuerpos . de ··facilitadÓn:inmuno~Ó~ica éorl1piten·. contra. aquellos qu~ tienen e!ecto citot6Xico in vi ~6. 'en l~ oc:upa~ió~ delos determina1ltes an~igelliioi tum~ral~s 14o , ; ~d~~¿s se sabe. que los anticue~pos de ti.po 1~9·.in'.: cC~;)~:1c.;y/ ;¿··_,~;;: iÚ ' ··.· ··.· .··•·· .•• ..•.•••..•.. / · ¡<,····.··,. , hi~en li!: s(ntésis ~é IgM,: .,, ·, ·· _e, las cuales po-r sú ma:yor,.cap~c;:id~d de . · fija.ci6~ d~/c¡;ri1J>1én'i~~to 'podr(an ·ser. de efecto citopáticoi11 .,,;i~o rriis ace~t~¡~~ i2~'. \;i•·i¡ .:<· .·. ;' /'• })<· . :;,',Fos'.~n~~\le':l'º~ ci···..t · o.tóxi.~P:;,~t~;~;ntln-···· •;· ·,,~:· -:<;:, in vÚ:;~·~n~fii61~~~rit~. ~u',éíecfo; ,yá;,q~·~·-.·~~.i~i~hir~/é~fii¿~ el~ ;de- \' - 29 - portante, como son aquellos que tienen eiectode facilita~i6n irufi;;ii() ..- lÓgica y los de efecto citopáti~o contra la célula maligna in v{vo, ,Exis­ ten en la literafara info~mes ?º· 135 de métodos que permiten naéer ". - . . ' - - - .· "-.- . . --- ·~ in vitrouna dif(lr~nc~acióndar,a entre ambos grupos y por t¡Ún6ti~o, ·paralo.s fin':~ d~l prl?sent~ trabajo,. se ha considerado.lahi~§t~~.i~.de · que lo_s a.llticu'.e~~os.qi.le fijan complemento autólogo sobre l~s' cé1;,.J:a.f tos ~llft~~~rpos.que no tienen la propiedad de fijar compl~Ill¿~*¿'.-fa~ó .... • ·¡~g6, i~ólogo o aiogénico, pu~de~}e~ C()nsiderados co~~di f~~~Úa.:. cióniniliunolÓgica 147 e. Hemos visto interiormente que la: réspuesta .•.. irunu'.iie de tipo humoral puede res~ta ineficaz en llevar a .cabo la. destrucción. d_e las ~élulas neoplásicas, cor1sideradas e:id:rai'las por el org¡ii:i.i.stTio'en función depresentar ANE. La ·respuesta inmune de tipo celular tam­ bié~pu'.(ld¿:fe~¡_;J.ta:r inefié:az en este sentido, por las consideraciones - -c¡~i;¡i~b~~{il1~WÓllésléxprés~~ : ·ElHnfocito normal tiene un efecto ANE; C:611'l~s qti~':~·nittraa ~n contacto; según fué demostrado por ..... ·.'. . ;·.i' i Govaerts de~de 1960> : . y confirmado. elegantemente por Rosen~u y - Moon cont~~ c~lulas ~alignas .149 Ellos observaron que las célu- las malignas son destruídas. in Vitro.por contacto dire--ct.o de linfocitos . ,-- . - - - _. ' ' inmunes, en ausencia de complemento. Esta. propiedad se adquiere -30 "' tempranamente, a juzga.'q>or el hecho de que e,n el ~atón el efecto citocÍdico ·. · •· •. ·.-.•. · .•· ...._ .. _... .. ·.. ·. '< .· •·· ... __ ·• •... e- >· >1so se manifiesta .claramente· a partir de la primera :semana de e.dad .•.. ; En este ·proceso el-linfocito puede•mol"ir:~Lej¿r~e.r sy :r:¿~o)5Í/.:r;~:¿o~pgr~ miento de los linfocitos eri la d~strui¿icSri d~ Gs' ~~l&l~s bl~-;{~~; ~~n'.sÍstl_¡(\ · una •agregaciÓn_delos_.mism~s• . ~6bf~.t~l~s·l's~z,:' · uri· ·-······· preV:i~. a.l~ ci_tolisit1 ·q~~·;pl1ede•u~ya.rse_ác_a,bosin ~~ql1e.rir e'¡-'a.hrii~ntÓ .•.•._ ·;. __ -__ .•• _:.•···•-:.·_ •• _ :/'i\••\ .. •_·••:.-\'<:Y•iss .·'.de. sfu~_esis,de: D~A'.nide•RNA• .. 'EfÚ~-~~sit§qú~-il\te;vi~n~.-~n ~l;~c~dt'~' é···--¿~i~~~~{6~-;~~~~5e"~:e~f:i-~~~~'ii'~i·J·;~~i~·uiJ~~á~l-.~-~·fl~?(~;~hic·~~¡-~ti-~e:r~•-·· ·. •· ~~,?~.?~~;'.~~~~~.1iTu~:11~~1;~~~;f ~ ~¡¡,;t-,i]fº t''º~ ·~ ,;•,;rfrihE .. 1;{1<1."títfri¿~/ciri 1:10; 1:25c;;q [:100 ; . .t a.l. parecer .dependiendo. del ta_maño Ci~:_1g~é'é1ii~a'.~~f-rd'estr~i/. ·si~:·~~-e~~e:··fe.11CÍ~-~no·--.6oncurr·~ .una fu~-~t·~- ex6~~--~~- de·c~~~f~~~-~i€¡c"&~·.a§plifica>unai140 160 veces_ •. Los· liníocit~s. normales .·.-. -'. /2=: ·._-/:':_:.;~-~-~-;~~-/:,,(.:~.~:.:::~~ ·;~:-·-_" ~>·: \"',';,/ _-~. ·.<'.· : .·. . ~ /~. .- -- -·: ~. . ·> • ejerc¡en::~1'1:ef_~7tC1 Cit?_tidico contra las celulas I1laligrias, ~íecto que· puede r!:; pi()(Íii~{I(;;•ti.~'~{ybpoi: tunaíerencia pasiva de linfocitos inmunizados a otros aniiliáfa~.\~*i~'s~qUe se ha observado que consecuentemente, destruyen.alas 162 células lllap1isicas • 163. En la. transferencia pasiva de linfocitos, las cé- lulas singénicas de los bazos de los animales no inmunizados. también pue- den ser electivas para evitar el crecimiento .tumoral en ratones infectados con virus oncogénicos LOG , particularme.nte si se aplican loaüinfocitos en un per(odo que no excedade.Wa.t_?~(as ~espués de la i.n!ecCión vir.al, efecto que se pierde entre los 14'.y 35 días después de la inoculadÓn lOi- ,· ----. -'~:'=:·--------, ,. ~-~..'..~ - . - --~ Si los linfocitos transíeridoll ~n elmodelo anterior se encuentran inmuniza- dos' las células neoplasicas aón destruídas totalmente' evitando el c reci- - 31 - lOZ miento tumoral • Esta inmunidad se manifiesta al poco tiempo de trans- ferirselos'linfocitos y es de larga duración,--Experimentc.s de esta(ndole - -~. .. :, ~.,l.~ ' -,: . -~:· - .- - - reali~ad()_B .e~ animale.s han servido de base para ensayar en humanos procedi- mientos i~!Tl~rioterapéuÜC:os contia el qáncer por medio de litÍioC:ito.s ·, .. · ·. ' ··. 164 ·:- -. . - . . - ' - : - . ". '-: --_ -~ :- . --_-' ; nes, ·como los de Moore . . . . . ._ ·' . _:_:-:::-:. .. ··- :-otra célula que .. pa~tÍcip{~~}.a' . : .>,- ,-'.- ·_;. resp11esta inmllne de tipo celulartdnt~.i-iii:s células blanco-, .también tiene e!~~to citoddico in vitro_}63;·l~~;~uái~rido 68 morir en esta reacÜón 167• 1 • ' . .:.· -.. · ._:·,·· --,._~:·:·_.::<.:·>.:.,<·---.-.-~<:..:.:" -. -· ' ·.. ·. · .... _.·' .,,. '• .... '. • • ;' ·, '"- ,:,._ ,; '·.;r ',_\' ~ • •"' ,' •' ' • - .,,,· •• ' •-. • • ',:, El macrofago inmune actua de.spues del reconocimiento espec1!ico del anti- .. ·• - ·.··. . , '- 169 < ·.. ·. ' ' ·.. ·· .. ·.· ... ··.·.·.. • • . geno de las_.celulas blanco : y estructuralmente se ha observado que des-. p~is··-~H (!On~a.cfo •. de{ ~c·r~fago con·.los. sistios antigénicos·d¡ las•c~lulas por desb:ui~.;)e pi~~ll~~Jhi ~tji.~n entre'ambas y posteri,C>rment~ u~ ~rotu~~rai! -.• ,\~ :;;_ : ' ,, ' .: ~····· ..•. ·. ... ., 170 cía y lisis de la mei;nbrana de .la celula blanco. . • . , ~, "-·:~ ::,e ;> .... 171-175 < ··-· __ , _. ·. 176~178 ..· e\; Los:hn!oc1tos .··.· . y.-los macrofágos · · .. ·.· ' ·, _-... ' . . "·> . ·. ·: .. ;· '. - ;:. • ·_''' _'·~.:' - .:,: '- - - - ·. --.. - ' - .. ---:, '•"C- • tienen en la su~~rfiC:i~é~elliia.r sitiás de re,ce~ción'.para antlgenos, que corres ponden estruc~ti~ii~e~e·a.;~s de c~·Jnbinaci~~ 174 antigénica de las lgG e ~gM 176-180 irununizaci§~;·per~ 'dicl:o aumento puede ~~r inhibido por la ciclo!osfámida 177 medicam~~t_o~~l!11>f«iad() con Jrecuenc:fa"Jn}¡¡. q~0~°:ter~pia de las ne opta- ~ _ ,·,--, ': ; • >; .; ~.:.>~ ., sias. . ' 181, 182 lugares de combinación para el fragmento Fe de las IgG el curso de la inmunización que presenta el paciente contra sus prdpfa~.cél~ las. neoplásicas se fijan anticuerpos contra éstas, es de suponer 'que -g~an cantidad de monocitos citoc(dicoa se unir(¡m a las células malignas y. podr(a:ri llevar a 'C:~bo su des'tr\.icción> Sin embargo, en humano11, ,dichos sitioi; uc .r~s,ep~J~fo.para ias lgG son ex~lusivos para las variedadés de inmunoglo- - ,---;-·c---=--"'"~-:===-"--;._':=,_~--""'~~b'.c-;;_==- =--=-;o_;~.~-·.. . ' ,- • .. , .' • ' ( . -• .· ..· .... · · tso:1s3~1s7~c · bl1lina.~~hjaci~.~-~s'4~\complemento "";~'dii;i~iti';;r:~xpl{cai ceñ' e ste.·•senti~~··Í~ fre!íic2t •.''•/< ; "· ís1.:u39· · ·co·-.· ·' •' s ee11él1¿n,tra'.~1~~t~?. ~(§ori}f>f eifi~ot~ ,< '•i,S . ~~~~-J6t ·a.~frf~~.rf1:Órí ·r a:a1 i '.". ··.-, 1:. ,•'···' ;,~:;'. ·~'";¡ _..'.:., ,<,'/,··.:_:o:·(?;·:·;. ¡--~·,. :-·''/:.:'. '·-: ·. tado·r. e· ·s· .·. n·• o•·_. .· l.·.b:_·ft~;J•:a;n·•.·•._·•.·."':.· ,. • , ~·'( - · ..'...~..?.: ?/· ~-···. .,•.·· ·_·..·•· . • .··. :, .. '/ .,., ··~ ,.. e..:-.·.' .·.~.\.< '···· , <::. -•_ ·_·_;J _-.·.·.'.'/:·. · · •. «; , · ,:.-:,.··.><·>:···:. . ··:~:.:e:,, .. ·:'·> ... ·::·-:-·~.~'.:,'.~'.~ ... ,. .. ,. ·:-'-~.,,.~!. ~~~·>~>1 ;:~·:·:·j··.:~~ · <.:~;;:z.":-:.'.,._. . .· . < ·· .. • is~~~i_,~~~fffr.é\,é!~'.~C~Y~~·s{ii6~ft9'~Tifr\-iun~s: ' .t i be ra, ~· ri~t: of ·,~·~·¡';h.i~i~iJ1"c1~)k,ii~~~·~ i4r1 :;~ ·ri')~6'i6r~i?s ,·(~HF};/ e¡, ¿o í1t~t~ii···· '·'·-- -!:·~'~:· ···:· '. - ;;._·_¿: !'·~": ;-,- ' la ·ri~ _~ ' ·: ·_ ... '. :.. -\ · -:· · ;·. < ·~ . './:~ -·:·:.-,· ;·.:>::< ,: - ·:_r. las Ig~. . ·~~~:rido_; e_stas. _se)tail co.~binado. previamente -·con· a.lgun~ antígei;iopero .;-···-·•,::·".:.;··:..<.:<,,, •.. .,.,., .·. ·.. ·.. · ... ·. · ...¡ 93. solo leí haceil·c«:>n los anticµerpos .fijadores .de complemento·.·.· ·· - -~--_::):;e~_;·~-::):_~~; :~~-;~4:;+;¡~~~~; ·;;._~~'.~ -' · 't .Ei'eíectocitopatti:·()'a1rniodtos ha, sido, .. -.· plená:~~!lt:{~níir~doioz, 148 • l62 • ta4;.i44 ' $11 e{ec~o es i~hibidopor 0 el suero del,p~~tador. dela neoplasia 195 .~ri1~'.~n!e;tllecl~d deHodgkin se ha observado que un má.yor. i~Íilt~a~q Íin{ofitli:ri.odéto:i gangli~.s afecta- La inmuni'." - 33 - _d a.w~~-;~i~r~~-,~~·:h~9p1~~1~~2%a!l;M'.1~--ig"'. -·~'·> .:.~;.:_:.~:.,~-:> ··.'.': :<·.; " --~--:':·-;· 1 nas 49,·1~8 O\ ··en !as· cua1~s ta#'~¿¡'.~~f~ t~m6,J~í.é:'f;~~~-~~n :A~E.~~ás)~m\1;,2_ g~niios:,_po~iblem~nt~ !>orq~e11;gh: ~:J:;fid'6i'ilir1ai~1a..~r~cidrichi'círi -·' : >.,.'; <. ·.: ~ .·': :: - :··_,._ <'· _-·_ :' ·~:.., ;;:'..: -·:'. ;"'·. ..., .:,;-<~.:\:··_:-':;-:: ,_,.(~\:-.~-~-!~;.:··.·t:-><~·:.: <>·'· :.,·;.·: ·- '; :f/. ::·-:;-:·:· ~.<;·:.:::";_<_·~.:":'.~;;_.: >·:·c.·· ..: ~~~~ko~ c_íiot~xi¿os ~~ rechaz.:~ ,,. •:··''. \}' ' ;. ·. ,;:>: ''.<·:; .. : \ -- ·-•.' ·. .· · i:>,of Ioil-téncioriado a:ritefiC>rrn~[\t~p~1e'd'f! clúirs¿)Ciu?Ja Pr~sen~i'i·~¡~ '.:~~;,~~~t~p·o~ íaé:ilitadC>re ~ \U~~¡'.1~r;,,~~i~t'is _.;· -'-··.o.· < -:-~:·,; • ' n:ia.1i~~~~:'.· ·,-:~·,.:.,-:·-0:--.-., .. /,::,.:iT"'::-·~:_,::;,~:~.;:--:·,:./·~':::~·:.:. : .:~-:-.;,-·:,_:J_>>.~/:.;.-·'. __ ··-·.::... -·-.. ··.· ··:· :.··.-:· .-.. -.;.::.--:~:.-,_:·<'.:'. './--.. :·<····.-.:- .-- .. e1ú ey~o,;::,_~s\~CIT.íJ.~~ .~r:ia. .l' IJª-Yº!,·.·. ti;a.:n~plantabi lida,d_ es¡> ?l'.lt_a ne o:.º ~xp~ i:1me.n- -t:1.~·e •iarie:~~;-~:1a;·. f~·e:ua(a su~ez ú.as1ci1sm6-débihn~nl~ir:ct~~~~I><>r - ·····::> '>;;·¿- la reacc.iónirib~kb16ii··: - 34 - RESUMEN Se·e~tuclÍaroI'l 17 casos con .tumor venére~ tra'!.!!. misibl·~·· .. c~~in.q'ot~~~5}.~.•·sij?:.~.~r~\¡gni;~Hc~c1~·c:lf~cr~····his.t91§gf~'.art1'.ente, i4 ·p e·r·~º~.p~~·~~ iit~.~ª:~J.t,~~~.J:.~~·~~·~:~t~~~~~·. . :4~·~.~ .~é··~.,ff ~~ ~~~X~a·/r/~n 2•·.~x·t~ -. .. _·,-. __· : · -.~ ,· - ::-;> ~--: ·:·:.,· .. :-~:-:_:_'_:.:; ..· --~·;:~-_: ·-·.·:::,::,-:1: ~:.'-. ·-:\- ·~:.:·_:. »;·· :.:·,::<:0_:~·:~·. !;T;:::~~:(~~-;~··::7_;~,·~:~·i·/-;~;:_··.,:~;·:·(:~~(:·._ ~ :·:-:;\~-.:-·:'_-·>·· '.:."-~·<:;:-e 2:_\··c: -__: -.·.;:.:-. • •. . ~ ._ .• mor. hab1a.. s.ido trasplantado'sugc,l1taneainente de cifrós.:an~males én todos .·: ::: ,:.;; ._-.~, ,_,,.--'.:·~/._' ''",',,:-,:;::;.'.·:{-'.',,'·-· . l()~ cas'o~ S¡;Obt\i;~;i:b~'p~'r}ó·iJi~'ric?,s,'J:}rnliestfas_po~ biOpf!fa¡de l.i ?eOplá- • ;:'.>··'.- :;.:.,:, ~·., .. - --- ,.·-:<<;" ·.-:.\.!:-',; i-~\<·Y/·.~·-·:\:.:-:·.'..¡<---~;:·:~:\J/-_>_:t·:_- <>:·<><_::··/-,_·<<>:_::>·:~ sta ~racti~.~º1~.~·:f (~fti,~~lqi¡j~~ u~;nies:~¡,:'.La~.¿diU1~s .. 11eoplásk~sfJ~r~n .· .·:dis6_ciadare nl.'.~~·,.,·.·:-.j::;:./.~:.>··.'>:-~~~'·,:_~y:,·~;·,_-;'._-:,·-;._,•·,'.,r>'>,,'..'.·-.. ··· .. · .... -· .. ,-.., · \« '.-_- ,_"·- , , ·,, "'.·_··:,,.', ····•' ::;- •··•·· ;:c~i€~~~~i~~i~1\f()ri·~~p~~ó f~tpl~go alog'éni¿oyd~ ··~0~1ej~, res\llt~~do·.ista~ ' ; .p;~iÚya:~·.~;fr~ó'.r1;~·'{J~ ~~~Jsci1~1ldo•la ··ru~ nle de .•.. .:on1pl~n1e~~()·~ ra'h~~er o'- . .. ·~ ;~1~;;.i~i~H~bl,~~Jd¿·e~t~·s resultados puede· c~nclui;se q~e l~s·c¿l.~las del tútroÍ'. ~e Sticke r· sC ln po rtadora:s de a nt(ge nos . n~aplasia ~es p~ci'fic o~~\que .· .. iri4u~.~n,·~il~brt~do~unarespues,ta irimune de· tipo· humoral c.o~···ro;tn¡\~i6n d~i~tidu~ipos ~~rrespondiMtes a los. de. facilitación inn:iunoLÓgica; .Se.· '. revisa~\~s :once~tos actu.ales acere~ de los•.·meéanismosinrriunolÓgicos qu~~ue2~.e~ime~tale~:~~·~oet.~;~··~.· sente, pe:ánÚi;ill .s~ntat'.tii.s'b~ses .· !aci.:~·>:.:.:·.~·-:·>:··~·'.<.;--.~:·;·~·-_::··· __.. ·_ .· 18. 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