UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MEXICO UNIDAD ACAOEMICA DE LOS CICLOS PROFESIONALES Y DE POSGRADO DEL CCH INSTITUTO DE ECOLOGIA EFECTO ECOTOXICOLOGICO DEL INSECTICIDA· METIL PARATION SOBRE LOS ORGANISMOS BENTICOS DE LA PRESA IGNACIO RAMIREZ T E s 1 s QUE PARA OBTENER EL GRADO DE: MAESTRA p R E s EN E N ECOLOGIA T A MARINA YOLANDA DE LA VEGA SALAZAR Jl MEXICO, D. F. BIBL IO TECA INSTITUTO DE ECOLOGIA l ' ""'1 1997 UNAM – Dirección General de Bibliotecas Tesis Digitales Restricciones de uso DERECHOS RESERVADOS © PROHIBIDA SU REPRODUCCIÓN TOTAL O PARCIAL Todo el material contenido en esta tesis esta protegido por la Ley Federal del Derecho de Autor (LFDA) de los Estados Unidos Mexicanos (México). El uso de imágenes, fragmentos de videos, y demás material que sea objeto de protección de los derechos de autor, será exclusivamente para fines educativos e informativos y deberá citar la fuente donde la obtuvo mencionando el autor o autores. Cualquier uso distinto como el lucro, reproducción, edición o modificación, será perseguido y sancionado por el respectivo titular de los Derechos de Autor. HONORABLE JURADO Presidente. Dr. Rodolfo Dirzo Minjarez. Secretario. Dra. Laura Martínez Tabche. Vocal M. en C. Liliana Favari Perozzi. Suplente Dr. Francisco Espinosa García. Suplente Dr. Constantino Macias García. Dedicada a la memoria de mi amado padre M. V. Z. AGEO DE LA VEGA MARTÍNEZ por el gran ejemplo de superación y tenacidad que siempre nos dio. A mi madre Sra. Genny Salazar S. A mis hermanos: Ageo, Oaudia Isabel, Leticia, Roberto y Sandra. A mis sobrinas: Paulina, Leslie, Genny y Tamara. Por su invaluable apoyo y cariñe;). AGRADEOMIENfOS Sin el apoyo extraordinario de muchas personas no habría sido posible elaborar este trabajo, por ello deseo dar las gracias a todos los que contribuyeron a este esfuerzo. Agradezco a la Dra. Laura Martínez Tabche por haber hecho posible la realización de este trabajo, al Dr. Constantino Macias García por su acertada dirección en el desarrollo del mismo así como al Dr. Jorge Carranza Fraser y M. en C. Francisco Rojo por haber sido parte del Comite Tutorial. A la M. en C. Liliana Favari Perozzi por su colaboración y las facilidades prestadas para la realización de los ensayos de enzimas, al Dr. Edmundo Díaz Pardo por facilitar el equipo de muestreo, y al Dr. Francisco Espinosa García por sus comentarios. Especialmente deseo agradecer al Dr. Rodolfo Dirzo Minjarez por su generoso apoyo y los acertados comentarios para mejorar este trabajo, así como al Lle. Ageo de la Vega Salazar por su valiosa ayuda con el equipo de computación, y a todas las persona que me alentaron para culminar esta meta. Abreviaturas Resumen Introducción INDICE CAPITuLOI INTRODUCOÓN Contaminación de cuerpos de agua Plaguicidas Descripción del área de estudio Hipótesis Bibliografía CAPÍIULOII 1 3 4 6 ~ 10 12 FACTORES FISICOQUíMICOS QUE DETERMINAN LA ACUMULACION DEL METIL PARATIÓN EN EL AGUA Y SEDIMENTO DE LA PRESA IGNACIO RAMÍREZ Introducción al capítulo Estratificación térmica Diagenesis química Eutroficación Objetivos Resumen del artículo Introducción del articulo Descripción del área de estudio Metodo Resultados Tablas Figuras Discusión Conclusión Referencias 15 16 19 20 21 23 24 26 27 31 39 43 34 38 49 CAPÍTUWID EFECTO ECOTOXICOLóGim DE LA EXPOSIOÓN PROLONGADA AL METÍL PARA TIÓN SOBRE LOS ORGANISMOS ACUÁ neos DE LA PRFSA IGNAOO RAM1REz Introducción al capítulo Organismos Bénticos Ecotoxicología Efecto tóxico del Metil Paratión Objetivo Resumen del artículo Introducción del artículo Descripción del área de estudio Metodo Resultados Tablas Figuras Discusión Conclusión Referencias Discusión General 54 54 56 58 60 63 64 66 67 71 85 89 74 84 % 101 ABREVIATURAS Acetilcolina ACh Acetilcolinesterasa AChE Fosforotionatos PI Gamma Glutamil Transpeptidasa GGT Glutatión s-Transferasa GSI Metil Paratión MP Metil Paraoxon MPoxon 4-Nitrofenol 4-NF (4-NP) Organofosforados OP Presa Ignacio Ramírez PIR (IRD) Sólidos Suspendidos Totales SST RESUMEN. Los ecosistemas acuáticos han sido tradicionalmente usados como depósito de desechos que generan problemas de contaminación. La contaminación con plaguicidas, incluyendo la presencia se residuos químicos en organismos acuáticos, representa un potencial riesgo ecológico. El Metil Paratión (MP) es un insecticida y acaricida. Pertenece al grupo de los insecticidas Organofosforados (OP). El MP es un compuesto muy inestable y la molécula se oxida fácilmente, obteniéndose el 4-nitrofenol (4-NF) por hidrólisis o fotólisis química a temperaturas ambientales altas o a la exposición química de luz visible o UV, en condiciones neutras o alcalinas. En agua, la hidrólisis ácida es lenta y la absorción en sedimentos puede evitar la hidrólisis. El MP es rápidamente metabolizado por plantas y animales por lo que es considerado poco persistente, y no se espera que persista o se bioconcentre. El sistema Lerma Chapala, constituye el recurso hidrológico más importante de la Mesa central en México; esta zona presenta endemismos de fauna íctica a nivel de familia género y especie. La Presa Ignacio Ranúrez (PIR) pertenece a la cuenca del río Lerma y alberga al menos tres especies nativas, el crustáceo Cambarellus montezumae, y los peces Girardinichthys multiradiatus y Chrirostorna riojai. En este estudio se midió la acumulación del MP en agua y sedimentos de la PIR para determinar si el efecto de factores fisicoquímicos tales como pH ácido o la elevada turbiedad pueden evitar la degradación o favorecer la acumulación del MP en los diferentes estratos, y la bioacumulación del MP en los principales organismos bénticos que habitan la PIR. Para conocer el efecto tóxico que produce el insecticida en los organismos se evaluó la actividad de las enzimas Acetilcolinesterasa (AChE) y Gamma-glutamil transpeptidasa (GGT). Además se determinó el efecto de los factores fisicoquímicos y ambientales que ocurren en temporada de secas y en temporada de lluvias en la PIR sobre la bioconcentración de MP y el efecto tóxico que produce en los organismos presentes. Se realizaron 2 muestreos, el primero en mayo de 1996 (en época de estiaje) y el segundo en septiembre de 1996 (en época de lluvias). En 2 ambos muestreos se colectaron muestras de agua y de sedimento en 10 sitios en la presa y se colectaron ejemplares de seis especies de animales y tres especies de plantas, en un solo sitio de muestreo. La PIR tiene las características de un sistema léntico, con la presencia de estratificación térmica en verano, eutroficación, disminución de oxígeno disuelto en el agua del fondo y la presencia de zona afótica en los sitios más profundos. Las principales diferencias entre las épocas de muestreo fueron el aumento de turbidez y concentración de sales, así como la disminución de oxígeno disuelto en el fondo en la época de lluvias. El MP y el 4-NF se acumulan en agua, sedimento y en los organismos acuáticos. La concentración de MP y 4-NF muestran una correlación negativa con el pH del sedimento y una correlación positiva con la profundidad •de la zona afótica. Los sedimentos de la PIR muestra un efecto subletal y genotóxico en bioindicadores, y la concentración de MP presenta una correlación negativa con la diversidad y abundancia de comunidades macrobénticas. El MP se bioconcentra en el tejido de los organismos, dependiendo del tiempo de exposición al insecticida, y la fisiología de cada uno. Además se encontró que el MP se bioacumula a concentraciones mayores en el tejido de flores, embriones y huevos lo que puede significar una amenaza al éxito reproductivo de las especies estudiadas. La actividad enzimatica de los organismos recolectados en la PIR en las dos estaciones de muestreo se vió incrementada de forma significativa con respecto a los organismos control. Se sugiere que el metabolito 4-NF está participando en el efecto tóxico al causar el incremento en la actividad de la AChE,mientras que el incremento en la actividad de la GGT puede indica daño orgánico, también puede ser un mecanismo de destoxificación a la exposición subletal del MP, por lo que se concluye que el MP esta produciendo efecto tóxico en los organismos. CAPÍTULO UNO INTRODUCCIÓN Los ecosistemas dulceacuícolas además de ser el hábitat para muchas especies, tienen numerosas funciones ambientales; reciclan nutrientes, purifican agua, atenúan las inundaciones, recargan el agua subterránea, y sirven de recreación para el hombre. El que los lagos ocupen una pequeña fracción de la tierra, no impide que sean de gran importancia como sistemas ambientales y como recurso para el uso humano. Los lagos y presas son usados como suministro de agua para beber, también han sido usados para muchos propósitos comerciales, incluyendo pesca, actividades piscicolas, transporte e irrigación. Desafortunadamente son también los ecosistemas más severamente degradados por el aumento en la liberación de sedimentos provenientes de construcciones urbanas, agricultura, silvicultura, y también reciben descargas de aguas residuales favoreciendo la contaminación de aguas superficiales con fertilizantes, detergentes, insecticidas, desperdicios industriales y desechos domésticos Gohnson et al. 1995; Lydear y Mayden 1995). Este incremento en la liberación de sedimentos, ha dado como resultado la excesiva eutroficación por entrada de nutrientes y materia orgánica, mayor turbiedad y sedimentación en ríos, lagos y presas, con la pérdida de la capacidad de almacenamiento de agua y el deterioro (cantidad y calidad) del hábitat para peces y vida silvestre (Committe on Restoration of Aquatic Ecosystems 1992), que está causando la extinción de especies. En México, donde la ictiofauna continental es de alrededor de 500 especies, con altos niveles de endemismos, actualmente más de 149 especies se encuentran amenazadas o en peligro y al menos 21 especies están extintas (de la Vega 1996). CONTAMINACIÓN DE CUERPOS DE AGUA El hombre genera más de un millón de clases diferentes de productos, como desperdicio y como productos útiles que pueden terminar en desperdicios. El uso extendido de productos químicos orgánicos, muchos de los cuales tienen efectos tóxicos, ha permitido que sean liberados al ambiente, produciendo daños en las comunidades naturales. La destrucción gradual de los sistemas naturales en parte, es producto de la contaminación ambiental (SCEP 1976). El impacto ecológico potencial es importante por la pérdida de las funciones de los ecosistemas acuáticos, como son: (1) la función hidrológica, (2) mantener la calidad del agua y (3) mantener la vida (Lowrence y Vellidis 1995). Un contaminante es definido, como una sustancia que ocurre en el ambiente, al menos en parte como resultado de la actividad humana, y que tiene un efecto adverso en organismos vivos (Moriarty 1983). La contaminación es la presencia de cantidades significativas de sustancias no naturales en el medio ambiente o concentraciones anormalmente altas de algún constituyente natural, que a esos niveles causa efectos indeseables (Mason 1991 ). Muchos contaminantes presentes en las cuencas de los lagos llegan por los ríos, canales y descargas de aguas residuales. La materia orgánica puede entrar al agua como ramas, hojarasca, flores, polen y esporas, heces y esqueletos de animales y como humus del suelo finamente dividido. Es también conocido que los contaminantes atmosféricos descargados en otras áreas entran a los lagos a través de la precipitación directa. La mayor diferencia entre ecosistemas lacustres y ecosistemas lóticos (ríos) es la relación en el volumen del flujo que entra y que sale, y que es retenido en el lago. En ecosistemas lacustres, los contaminantes que entran permanecen en el sistema por periodos relativamente largos y están sujetos a transformaciones físicas, químicas y biológicas. Hay varios factores que controlan la permanencia de los contaminantes que entran a los lagos: tamaño, forma, profundidad, la sedimentación, la dispersión, tiempos de residencia, condiciones de temperatura (grados de estratificación), condiciones hidrometeorológicas, el régimen hidrológico e interacciones bióticas. Algunos o todos estos factores pueden influenciar la distribución de contaminantes en lagos: La interacción entre el fondo y el agua superficial es muy importante para determinar la calidad del agua, el proceso de erosión, deposición y resuspensión del sedimento, dependen de la variación en el estado de turbulencia y son muy importantes en la dispersión y mezcla de un contaminante en el agua que las recibe (Welch et al. 1992). 5 Hay varias corrientes en los lagos tales como el flujo horizontal por la acción del viento. Estas corrientes transportan los contaminantes desde puntos donde los contanúnantes son descargados a el otro lado del lago, por ello generalmente no se observa una distribución homogénea vertical ni horizontal de los contaminantes en los lagos. Los procesos de sedimentación afectan directamente la cantidad total de contaminantes en los lagos. Los contaminantes descargados en los lagos en forma suspendida y disuelta que han sido transformados en forma de partículas, precipitan al fondo con el tiempo. Estas sustancias no contribuyen en la contaminación del agua, y el proceso de sedimentación es importante por tener el principal papel en la autopurificación. La liberación de los contaminantes del fondo del sedimento al agua, es el fenómeno adverso de la sedimentación. La cantidad del contaminante aumenta en el agua por la liberación. La resuspención de partículas del sedimento al agua es causada por la actividad del bentos y por las corrientes de agua (Okada 1992; Moss 1992). La entrada de contanúnantes a los cuerpos de agua pueden afectar a los sistemas de forma directa produciendo efectos tóxico o de forma indirecta modificando las características fisicoquínúcas. La contaminación orgánica ocurre cuando grandes cantidades de compuestos orgánicos que pueden actuar como sustrato para microorganismos son liberados en el agua. Durante el proceso de descomposición el oxigeno disuelto en el agua puede ser usado a una tasa mayor que la que puede ser reemplazado, causando una deficiencia de oxígeno, con severas consecuencias para la biota. 6 Los afluentes con alto contenido de materia orgánica, frecuentemente también tienen gran cantidad de sólidos suspendidos los cuales reducen la cantidad de luz disponible para los organismos fotosintéticos, y alteran las características del agua produciendo un hábitat inadecuado para muchos organismos (Mason 1991). En casos extremos, la sedimentación excesiva puede significar la pérdida de la capacidad de almacenamiento, disminuyendo la utilidad de los lagos para regular la disponibilidad de agua, su valor recreacional y cantidad y calidad de hábitat para peces y vida silvestre. El problema más extendido es la contaminación de lagos y ríos por descargas provenientes de las actividades agrícolas son los nutrientes y plaguicidas asociados que fueron aplicados para fertilización y control de insectos, los cuales, frecuentemente los lagos no pueden eliminar por sí mismo (Committee on Restoration of Aquatic Ecosystems 1992). Las prácticas de cultivo resultan en un incremento en la erosión y un aumento en los Sólidos Suspendidos Totales (TSS) en las aguas que los reciben. Flujos de retomo de riego (o inundaciones) pueden acarrear altas concentraciones de TSS, fertilizantes y plaguicidas. La aplicación aérea no controlada de plaguicidas puede ocasionar la contaminación del aire y alcanzan los ecosistemas acuáticos al ser diseminados por el viento. A pesar de que en América Latina existen numerosos ejemplos de contaminación de agua, suelo y aire con estas sustancias, con los datos disponibles no es posible evaluar totalmente su magnitud ni el efecto que producen a los ecosistemas que los reciben (OMS 1993). PLAGUICIDAS Los plaguicidas son sustancias usadas para proteger a los humanos contra insectos vectores de enfermedades, a los cultivos de la competencia con hierbas indeseables, y a los cultivos, plantas y ganado de enfermedades y depredadores. A pesar de los considerables beneficios de los plaguicidas, su uso extenso e inadecuado ha causado importante deterioro ambiental. Los plaguicidas comprenden varios grupos de químicos que pueden ser clasificados de acuerdo a : (1) el organismo o plaga contra la que actúa, (2) El sector en el que se usa, tal como, agricultura, hogar o bosque y (3) su estructura química (Freedman 1989). El uso de plaguicidas en América Latina casi se duplicó, y en algunos casos se triplicó durante el período de 1980a1990. Hay una tendencia general hacia la disminución del uso de plaguicidas órganoclorados muy persistentes, y a la utilización de productos menos persistentes, pero más tóxicos, como los carbamatos y compuestos órganofosforados. De acuerdo con la información que existe, los principales contaminasteis de los alimentos en México son los plaguicidas órganoclorados y sus productos de biotransformación; en segundo lugar están los residuos de plaguicidas órganofosforados. La presencia de estos se debe probablemente a deficiencias en las prácticas agrícolas (OMS 1993). 7 El metil paratión (MP) es un insecticida y acaricida que pertenece al grupo de los insecticidas órganofosforados. F.stos son inestables y relativamente poco persistentes; en condiciones alcalinas se hidrolizan a productos inertes. F.stos productos son sumamente tóxicos al hombre y a otros manúferos por inhalación e ingestión, debido a su gran penetración percutánea, por interferir con la actividad de la acetil colinesterasa (AChE) en el sistema nervioso (Meister 1992; OHS 1991). El MP tiene una vida media corta cuando es aplicado a los cultivos (1 Hr.), además de que se ha reportado que es rápidamente metabolizado por plantas y animales, no se espera que persista o sea bioconcentrado, por lo que se considera que el riesgo para la salud por el uso del MP es bajo (lfayes y Law 1990; Meister 1992). La producción anual de MP en México es de 4000 toneladas anuales, lo que representa el 25% de la producción total de insecticidas y acaricidas, su aplicación se reporta en los 32 estados de la República y no se recomienda ninguna restricción en su uso (CNE 1988). 8 El 4-nitrofenol (4-NF), producto de la descomposición del MP no es absorbido por partículas del suelo y puede contaminar el agua. La EPA (US Environmental Protection Agency) ha establecido niveles seguros para la salud humana de 60 µg/L de 4-NF, en agua para beber; concentraciones más altas o a los mismos niveles por tiempo prolongado, causa efectos adversos a la salud, incluyendo estrés respiratorio, daño hepático e inflamación en el estómago y ha mostrado ser tóxico para aves y peces (US EPA 1990). DESCRIPCIÓN DEL ÁREA DE ESTUDIO. El sistema Lerma Chapala, constituye el recurso hidrológico más importante de la Mesa central. Tradicionalmente en esta región se ha llevado a cabo una gran explotación de recursos naturales, y se han favorecido grandes asentamientos humanos, como es el caso de las ciudades de Toluca, Querétaro, Salamanca, Guanajuato y Morelia, entre otras, se trata de una de las regiones más densamente pobladas del país. Esto ha dado lugar al desarrollo de zonas agrícolas, pecuarias, corredores industriales de gran importancia económica que en conjunto han contribuido a que el río Lerma figure como uno de los más contaminados del país (Díaz Prado et al. 1993). El presente estudio se realizó en la Presa Ignacio Ranúrez (PIR), construida sobre el río La Gavia, unos 22 Km al Noroeste de la ciudad de Toluca y 5 Km aguas arriba de la confluencia de esta corriente con el río Lerma en el municipio de Almoloya de Juárez del Estado de México. La presa recibe la afluencia de los Ríos El Salitre, El muerto, Las Cebollas, San Pedro, el Guajolota, El Almoloya principalmente. Área de la Cuenca: 505 Km2. Construcción: Las obra de construcción de ésta presa se iniciaron en 1964 y se comenzó a almacenar el vaso, con fecha 7 de Junio de 1965. V aso: La capacidad total del vaso hasta la elevación 2 548.40 m, (correspondiente a la cresta del vertedor), es de 20.5 millones de m3, disponiendo de un almacenamiento muerto de 1.7 millones de m3 hasta la elevación de 2544.00 m, que corresponde al umbral de la toma. (toda elevación es a partir del nivel del mar) (BH-50 1970). 9 La capacidad total de almacenamiento de la PIR es de 20.50 millones de m3 de la cual se obtiene un volumen total utilizado de 93.30 .millones de m3 al año usados exclusivamente para riego (INEGI 1994). Municipio de Almoloya de Juárez Estado de México La población económicamente activ~ de los de 34 ejidos y comunidades agrarias al rededor de la PIR ocupan un total de 21 974.380 ha., y realizan actividades de agricultura, ganadería caza y pesca. Los principales cultivos son maíz, avena forrajera, papa, chicharro y haba verde. 31 ejidos y comunidades agrarias practican la cría y explotación de animales y algunos ejidos se dedican a la explotación forestal principalmente de pino y oyamel (INEGI 1988). El MP es el insecticida de mayor uso en la región (CNE 1988). El clima es templado, subhúmedo con régimen de lluvias en verano (julio, agosto y septiembre), con una pluviosidad total de 822.5 mm. Los meses más calurosos son mayo y junio; la temperatura media es de 12.4ºC. Otro aspecto relevante es la erosión del suelo en la zona por erosión hídrica, consecuencia de la desforestación y erosión media, provocada por las ineficientes prácticas agropecuarias en suelos con pendientes pronunciadas, y por un deficiente manejo de los recursos hidrológicos (INEGI 1994). 10 HIPOTESIS Dado que en las actividades agrícolas que se realizan al rededor de la presa Ignacio Ramírez, se utiliza MP, entonces puede estar presente en el cuerpo de agua. Si la presa Ignacio Ramírez presenta estratificación térmica en verano y condiciones de anoxia en el hipolimnio, que eviten que el MP sea degradado por hidrólisis ó fotólisiS, entonces se podrá producir la su acumulación en el sedimento de la presa y podrá ser tóxico para los organismos tóxicos que la habitan. Considerando los antecedentes descritos, surgió el siguiente cuestionamiento: - La presencia de la cortina en la PIR produce acumulación de agua y un aumento en la acumulación de sedimentos. Por tanto, ¿Cuáles son las características físicas y químicas que prevalescen en la PIR? ¿La acumulación de agua da a la presa las características de un sistema léntico? ¿Se presenta estratificación térmica y condiciones de anoxia durante la etapa de estratificación en verano, que pueden evitar la degradación de los contaminantes orgánicos y favorecer la acumulación de·MP en el sedimento de la presa? ¿La excesiva sedimentación ha dado a la PIR las características de un sistema eutrófico? ¿Se ha producido Acumulación del MP en los constituyentes de la presa? 11 En caso de que el MP se acumule en sedimentos. ¿Puede ser reciclado y aumentar su toxicidad por aumentar el tiempo de exposición del contaminante? ¿Es el MP tóxico para las especies que habitan la presa? ¿Pueden los efectos de la Eutroficación alterar la toxicidad del MP? Para poner a prueba las hipótesis propuestas, se realizó el estudio en la Presa Ignacio Ramírez colectando en dos épocas distintas, en Mayo de 1996, (durante la época de secas) y en Septiembre de 1996 (durante la época de lluvias), y se consideraron dos aspectos: l. Factores fisicoquímicos del agua y sedimento que pueden determinar la acumulación del insecticida MP en los componentes abióticos de la presa. 2. El estudio ecotoxicológico en los organismos bénticos que habitan la PIR para conocer el efecto tóxico que produce el insecticida MP en estos organismos. En los siguientes capítulos se aborda la explicación de estos temas con una introducción general y se incluye en cada uno un artículo sometido para publicación, por lo que puede encontrarse cierta redundancia en algunos puntos. 12 BIBLIOGRAFÍA Boletin Hidrológico No 50 (1970) Cuenca del Rio Lerma Hasta la presa Solis del Lago de Patzcuaro, del Río Grande de Morelia Hasta el Lago de Cuitzeo y de la Laguna de Yuriria. Torno I y IV. Secretaría de Recursos Hidráulicos. Subsecretaría de Planeación . División General de Estudios. Dirección de Hidrología. Comisión Nacional de Ecología (CNE) (1988) Información General de Ecología. Cornite Nacional Calificador de Insumos. Dirección General de Protección Agropecuaria y Forestal SARH. Cornrnittee on Restoration of Aquatic Ecosysterns: Science, Technology and Public Policy (1992) Restoration of Aquatic Ecosysterns Science Technology and Public Policy. Water Science and Thech Board. Cornrnisson on Geosciences, Envirorunental and Resources National Research Council. National Acadernic press. De la Vega Salazar M. (1996) Causas de la degradación ambiental y pérdida de la biodiversidad en ecosistemas dulceacuícolas. Ciencias (en prensa). Díaz Prado E., Godinez R. M., López L. E., Soto G. E. (1993) Ecología de los Peces de La Cuanca del Río Lerrna, México. An. Ese. Nal. Cienc. Biol. 38: 103-127. Freedrnan B. (1989) Environrnental Ecology. 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El MP es un compuesto que se considera muy inestable ya que la molécula se oxida fácilmente obteniéndose el 4-nitrofenol. Esto resulta de la hidrólisis metabólica o por fotólisis química a temperaturas ambientales altas o por la exposición química a luz visible o UV. Los compuestos organofosforados se hidrolizan bajo condiciones alcalinas neutras y ácidas, obteniéndose productos que no causan efecto en la inhibición de la AChE. Sin embargo, en condiciones ambientales la hidrólisis ácida es lenta y la absorción en sedimeñtos puede evitar la hidrólisis (Draber et al. 1992; Schmidt 1994; OHSI 1991). En estudios in vitro se ha demostrado que este insecticida se degrada rápidamente en agua de mar, en agua de ríos y lagos. La degradación es más rápida en la presencia de sedimentos (Howard 1989). Muchos tóxicos orgánicos pueden ser degradados por los procesos de fotólisis, mientras que la asociación de muchos contaminantes en el sedimento y a la materia 16 orgánica puede inhibir la fotodegradación (Munawar et al. 1984), lo que permite suponer que las características de los sitemas lénticos podrían evitar la degradación del MP. El efecto de los contaminantes en los ambientes acuáticos esta determinados por las características físicas del agua que los recibe. Un tipo de ambiente efectivo en la dispersión del contaminante, puede presentar bajas concentraciones, mientras que otro ambiente con poca capacidad de dispersión puede producir altas concentraciones de contaminante. Los cuerpos de agua estáticos son conocidos corno sistemas lénticos, representados principalmente por los lagos (naturales o artificiales). En ellos el movimiento de las aguas en la cuenca está determinado por la rnorfornetría (profundidad, forma, etc.), entrada de calor solar y viento (Wekh 1992). Para poder entender el proceso que siguen los contaminantes dentro de un cuerpo de agua, es necesario entender la naturaleza de los sistemas acuáticos y las características ficoquírnicas que puedan determinar la permanencia del xenobiótico, en este caso MP dentro de un cuerpos .de agua. Estratificación térmica La capacidad calorífica del agua es mayor que la del aire, por lo que los rangos de temperatura diurnos y anuales (máximas y núnimas) son menores en agua que en aire. Por ello los ambientes acuáticos se reconocen por ser más estables en temperatura. Las interacciones físicas, químicas y biológicas están dadas por el ciclo anual de temperatura. La mayor fuente de calor a los lagos es la radiación solar. Luz de una longitud de onda de 750 nrn, por ejemplo, el 90% es absorbida en 1 m y sólo el 1 % es transmitida a 2 m de profundidad en agua pura. La absorción de la luz se incrementa marcadamente por la materia disuelta y suspendida en el agua. Gran parte de la energía solar es de longitud de onda larga en la porción del infrarrojo, y solo el agua superficial de los lagos absorbe la radiación. 17 La alta capacidad calorífica del agua permite la acumulación de la energía luminosa como calor. En las zonas templadas, la temperatura del agua aumenta más de 4ºC a través de la columna de agua de los lagos en primavera y verano. Esto puede hacer más difícil la mezcla vertical del agua del lago y formar gradientes a lo largo de la columna de agua. Por la acción del viento en la superficie de los lagos y la fluctuación diurna de la temperatura atmosférica, el agua superficial se mezcla fuertemente, y la temperatura es relativamente uniforme debajo a una profundidad específica del agua. Además, se observa una capa media llamada Termoclina o Metalimnium caracterizada por una rápida caída de temperatura. Epilimnium e Hipolimnium son las capas superiores e inferiores a la termoclina respectivamente. El hipolinuúum es caracterizado por bajas temperaturas y baja penetración de luz (Fig. 2.1). Una parte de la luz solar es reflejada en la superficie del agua, mientras que otra parte penetra al agua y su intensidad decrece al aumentar la profundidad del agua. La producción fotosintética decrece a lo largo de la columna de agua por el decremento en la inten.5idad de la luz. Para que se produzca crecimiento del fitoplancton se requiere que la fotosíntesis (p : solo de día) sea mayor que la respiración diaria (r : 24 hrs). La zona donde la relación [(p - r)>O], es llamada zona eufótica o productiva y, la zona más baja donde la relación es menor que cero [(p - r) 02.5 3 3.5 4 .L 15 17 19 21 remperature º e 23 25 ··-1 23 25 O·¡+--- ·I ·r 0.5 + º · ~ -1 1 J. E1 .5 l t•t ¡ 2 t;;:;;;;;, ~ 2 ~2 . 5 . !2.5 · · 1 3 l ,: t 3.5 t 4 . 4 · T-rwncy 15 17 19 21 23 25 o 2 4 6 8 Temperatureº C Oxygen (mg/L) - ·-1·----j --··- - t----·- .¡ 0.5 T~ g1 .5 E g1 ·5 -· §. 2 . ª 2 . e!: 2.5 ~2 . 5 F 3 3 ·•· 3.5 3.5 - 4 - 4 - 15 17 19 21 23 25 o Temperatureº C 2 4 6 Oxygen (mg/L) 8 FIG. 2. Vertical distribution of temperature in water at Ignacio Ranúrez dam in: (A) site 4 in May 1996, (B) site 8 in May,(D) site 7 in September 1996 and (E) .site 8 in September. Vertical ditribution of dissolved oxygen in water in site 8 in: (q May and (F) in September. .... .... 3 60 - a $ 40 LS) A DO AHORRAS e + q 0123458678910 Site of sampling 14 - 12 - 10 a o. 61 EV E 2d a Do ote eo oie ode de 0123458678910 Site of sampling E O V N A D O = w a o == — P A P A » o im o ad . jp E—= Js ci 23456780910 Site of sampling To ta l Ph os ph or us (m g/ L) se? —4— Surface Dry 350 300 - 250 | 200 + Er 5 150 5 100 + a - 07 A e 012345678910 Site of sampling : —+-D 012345678910 Site of sampling 5S + 340 E 2 E 20 310 | Oe o po 0123458789410 Site of sampling =D Bottom Dry —A— Surface Rainy 8 | Na /4 : 7.5 + EN AA 6.5 - Bo + O o 012345678910 Site of sampling A m m o n i a (m g/ l) O N A a o0s 0 o 0123458678098410 Site of sampling a] AA 0123456780910 Site of sampling —0— Bottom Rainy FIG. 3. Vertical and seasonal variation of suspended solids, turbidity, pH, nitrate-nitrogen, nitrite-nitrogen, ammonium-nitrogen, phosphorus, sulphates and hardness in water at each sample site (site 10 is not included in the plot because the point was outside the dam). No significant difference was found in vertical variation in any parameter, but the difference was sienificant in seasonal variation. ANOVA (P<0.05). Sp ~140 + ~ ñ É.120 -!-. ~ 1 0 • 11~~ 1! . 0 - }2~ : ~ ~.Q o 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 lt f pling 14 1 i ~~ 1 ·.•. - 8 ! 6 - :-= 4 - z 2 -! • a o ~ - ---· - -t-1--- - l -·+--1-¡c,- i- .¡. -t o 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 it f pling i 1 l ~ a 3 4 5 6 7 8 9 10 Slte f pling -- urf ce ry 350 t 300 - ~250 .. . ~ l:!::-2 0 t ~150 • ~ 100 -i ~~ ± ~9 o 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 lt f pllng 0.35 0.3 i0.25 - 0.2 ~0.15 = 0.1 z0.05 - • º ~ ~ o 50 . 2 3 4 5 6 7 lt f pling i:. 1s:;;:. D .; 20 :::: . ~ 10 o . - _-+·-+--+-+-t-+-+--+-' o 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 lt f pllng -o- ott ry -e- urf ce ainy e T ! ~l!I 7 . 5 ~ · - ~~ a.1 1- ~ .5 -- 6 . - ---1- - 1----t----+---t-f·-t---'----i o 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Slte f pling 12 1 ,10 ' -8 .!! e 6 -·· ~ 4 ~ 2 o -l ~~ i6oo o 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 lt f piing ;:;-400 o ~300 .,.200 -- ~~ • 11º~ : ~ _ : o 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 it f pling ........ ott ainy I . . ertical d sonal riati n f nded lids, t r idity, , itr t - itr gen, itrit - itr en, monium-nitrogen, osphorus, l hates d r ne s i ater t ch ple ite ite i ot i l ed i t e lot cause t e oint as tside t e a ) . o i ificant iff r ce as nd i ertical ariati n i y o ra eter. ut t e iff r ce as imifi ant i sonal ariation. OV A I 0.05). ~ "" ºº" 1 0.014 " º·"' j ~ 0.01 g e: o ., 0.008 ~ 111 ll. >. -5 CD 0.006 ::¡¡ 0.004 º~ L _.Il_J., 1 1 2 2 3 D R D R D •W·S •W·B aSadlmant 1-l1 J_J_ ... .. . · __n_ -- - ~ - - JLJLJLL _ ,._q ___ ~ 3 4 4 s s a a 7 7 a a D D 10 10 R D R o R D R D R D R D R D R Station and site of sampling FIG. 4 Methyl Parathion concentration in water surface (WS), water bottom (WB) and sediment Labels on the X axis indicate both site and season (D=dry season, R• rainy season). Significant differences were found in vertical and seasonal variation in MP concentrations, ANOV A (P<0.05). ~ 3.5 3 j 1 2.5 e; i 2 o e: CD "á .~ 1.5 z ..¡. 0.5 o ---,Il ' -~ •• J ~ --l ~~ ~ ·-~ t~ , o , R 2 D R 3 o 3 R 4 4 5 5 6 6 7 O R O R O R O Station and site of sampling 7 R ¡ 11 8 D •w-s •W·B OSedlment 1- ~ 1 l·-· l!lf- - 8 R 9 D g R 10 o FIG. 5. 4-Nitrophenol concentration in water surface (WS), water bottom (WB) and sediment. Labels on the X axis indicate both site and season (D=dry season), (R=rainy season). Significant differences were found in vertical and seasonal variation in 4-NP concentrations, ANOV A (P<0.05). ~ .... cr,0.014 T ~0.012 'Ce ,§. 0.01 §0.008 ~ ('!0.006 ~ >.º·ºº4 ~0 . 002 o A • • r = 0.9399 P<0.05 • Mr¡ • 5ept9mber --•-+----- - 1 - .. 1- - - ---t----+- - +---+-·· - . - -1 O.E+OO 1.E-07 2.E-07 3.E-07 4.E-07 5.E-07 6.E-07 7.E-07 8.E-07 9.E-07 10-i>H 3: I 0.014 1 • 0 0.012 1 e o i B ~fs l ¡0.01 ~ 1 r = 0.88 ~ 2 r r =0.9851 5o.ooi P=0.05 ~~ i .e 1.5 .¡ ~ 1 ~ ~ - ~ ~ · - -· ~ !~ L - • -+-- -· - - --- - +--- -- - + - - -- -- · ... --- -·- 1 .. OE.00 2.E-07 4.E-07 6.E-07 8.E-07 o 0.5 1 1.5 2 10-!>H Depth of aphotic zone (m) FIG. 6. Correlation (A) between 10-pH and MP concentrations in sediment in May and September. Test for equality of slopes was done to compare the analyses of regression separately for each of the May and September & dates, difference is not significant ANOV A F= 4.30 P< O.OS ANCOV A F=3.88 P<0.05.!Sokat 19811. (B) Correlation between 10-pH and 4-NP concentrations in sediment in May and (Q correlation between depth of aphotic zone and MP concentrations in sediment in May. REFERENCFS Algren Y., Waara T., Vrede K., SOrensson F. (1994) Nitrogen butgets in relation to microbial transformation in lakes. Ambio 15, 367-377. 49 Beckert W., López Avila V. (1991) Standardisation of sample extract cleanup and analytical conditions for more efficient determination of organic pollutants. In Powlowski L., Lacy W., and Dlugosy J. (Eds.) Chemistry for the Protection of the Environment Science Research. Vol. 42 Plenum Press N. Y. 113-126. Bohác J., Fuchs R. (1994) The structure of animal communities as bioindicators of landscape deterioration. In Jeffrey D. W. and Madden B. (Eds.) 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CAPÍTULO III BIB L IOTECA INSTITUTO DE ECOLOGI A UNAM EFECTO ECOTOXICOLÓGICO DE LA EXPOSICIÓN PROLONGADA DEL METIL PARATIÓN SOBRE LOS ORGANISMOS ACUÁTICOS DE LA PRESA IGNACIO RAMÍREZ INTRODUCCIÓN Los considerables beneficios de el uso de plaguicidas tiene la desventaja de producir importante daño ambiental. Un problema ecológico muy importante es la extendida contaminación del medio ambiente con plaguicidas, incluyendo la presencia de residuos químicos en animales y agua (Freedman 1989). La contaminación de fuentes de agua con plaguicidas puede afectar a organismos acuáticos incluyendo peces (Hernández 1990; Rastogi 1990). El sistema Lerma Chapala, constituye el recurso hidrológico más importante de la Mesa central, en la actualidad esta zona presenta endemismos de fauna íctica a nivel de familia género y especie, como es el caso del género Chirostoma, la familia Goodeidae y los ciprínidos de los géneros Algansea y Yuriria. La presa Ignacio Ranúrez se localiza en la región del Alto Lerma que señalaba la presencia de 16 especies de peces. Debido a los cambios ambientales ocurridos en éste cuerpo de agua actualmente es posible encontrar especies de peces tolerantes a cambios ambientales como podrían ser: Notropis sallaei (nativa), Girardinichthys multiradiatus (nativa), Chirostoma riojai (nativa) y Cyprinus carpio (introducida) (Díaz Prado et al. 1993). Organismos Bénticos Los hábitats litorales son considerados los que incluyen la parte del fondo del lago entre el nivel más alto del lago y la zona afótica 55 profunda. Los hábitats profundos incluyen el fondo bajo la zona- afótica. Las comunidades que crecen en éstos hábitats dependen del suministro de energía de detritus provenientes de las capas superiores. En los hábitats litorales y profundos, los organismos que están asociados con el fondo son llamados bénticos. El fino sedimento en el litoral tiene las comunidades más complejas. Hay una muy diversa comunidad de bacterias, protozoarios y algas. A esto se suman plantas sumergidas y flotantes, con sus epífitas asociadas, invertebrados y peces (Me Call y Tevesz 1982 ). En los bentos profundos hay una comunidad relativamente simple de bacterias, protozoarios, invertebrados y peces. Muchas comunidades profundas están dominadas por larvas de chironomidos, y gusanos oligoquetos. En lagos fértiles, la desoxigenación puede confinar el crecimiento béntico bajo el hipolimnium a las etapas frías del año cuando el crecimiento es lento, y solo bacterias anaeróbicas y algunos protozoarios son los residentes activos permanentes (Moss 1992). Los sedimentos son el asiento potencial de productos químicos orgánicos e inorgánicos que entran a ecosistemas acuáticos. La concentración de químicos en el sedimento puede directamente afectar a los organismos bénticos (Kent et al. 1994). La fauna macrobéntica puede mezclar los sedimentos en que vive por sus actividades alimenticias o la construcción de sus madrigueras o ambas, dando como resultado el cambio en el flujo químico de materiales disueltos liberados del sedimento (Fisher 1982; Me Call y Tevesz 1982 ). Examinar las comunidades puede ser útil para determinar el efecto de los contaminantes en la diversidad de especies. Muchos pequeños cambios en las comunidades pueden estar relacionados al contaminante, pero es esencial demostrar que éstos cambios tienen un significado ecológico, que reduzcan la adecuación de una población (Gibbons y Munkittrick 1994). Poblaciones y comunidades de invertebrados son ampliamente usados para monitorear a escala local, en cuerpos de agua ya que estos grupos tienen cuerpos de tamaño pequeño y baja tendencia a la migración, y son útiles para indicar factores ambientales tales como aplicaciones inadecuadas de fertilizantes y plaguicidas (Bohác y Fuchs 1994). Ecotoxicología La ecotoxicología estudia el efecto de los productos quínúcos en la estructura y función de las comunidades bióticas y en su interacción con los componentes abióticos (Schaeffer 1991). 56 La necesidad de predecir efectos ecológicos de los contaminantes quínúcos, se debe a que el riesgo de los contaminantes depende no solo de su toxicidad química, sino también en la cantidad liberada al medioambiente, su tendencia a dispersarse, la persistencia en el medio y la disponibilidad para los organismos en los diferentes sistemas. Se deben considerar tres situaciones biológicas de la relación entre exposición y la cantidad de contaminante dentro de los organismos, es útil distinguir, para animales, entre captación de contaminante por el alimento y directamente del medio abiótico: Bioconcentración, es el incremento de la concentración de contaminante del agua cuando pasa directamente a las especies acuáticas. Bioacumulación, también es el incremento en la concentración de contaminante, pero indica la captación combinada del contaminante por el alimento y por el agua. Biomagnificación, indica el incremento en la concentración del contaminante en tejidos animales en miembros sucesivos de una cadena trófica (Moriarty 1983). La evaluación de ecotoxicidad debe incluir la duración de la exposición al xenobiótico y la duración y magnitud de la respuesta. Se pueden distinguir varias categorías de efectos tóxicos: Toxicidad aguda. El cambio estructural definitivo (por ejemplo, alteración de la diversidad o pérdida de especies) ocurre después de una o varias exposiciones dentro de 24 hr. Toxicidad subaguda. El cambio funcional (por ejemplo, disminución de la productividad, aumento o disminución de biomasa) resulta de dosis repetidas en un periodo relativamente corto. Toxicidad subcrónica. El efecto adverso resulta de exposiciones repetidas durante un periodo que comprende menos del 10% del tiempo promedio de vida de las especies. . Toxicidad Crónica. El efecto adverso resulta de exposiciones repetidas durante una porción de la vida promedio de la especie mayor del 10%. Los efectos de los contaminantes pueden ser: Letales, subletal (una exposición a concentraciones bajas que no mata dentro de un tiempo corto), lesiones, enfermedades tóxicas, disminución de la resistencia a otro tipo de enfermedades, aumento a la resistencia a los tóxicos (por adaptaciones, selección y mutagénesis), carcinogénesis, teratogénesis, alteración en la reproducción (Schaeffer 1991 ). Los contaminantes frecuentemente están presentes en agua a concentraciones muy bajas no letales, esto no representa que no sean tóxicas ya que pueden impedir el funcionamiento normal de los organismos. Las pruebas de toxicidad predicen exitosamente el daño fisiológico en los organismos. El uso toxicológico de niveles enzimáticos como medida del daño orgánico tiene su origen en la medicina clínica. El bioensayo de enzimas es un parámetro útil para detectar efectos subletales de contaminantes tóxicos. La actividad enzimática es la base de la función celular, cualquier inhibición, estimulación o pérdida de la cantidad de las enzimas, indican desbalances bioquímicos y degeneración célular, y pueden producir un desequilibrio químico que puede ser reversible o, si es suficientemente severo, causar la muerte celular (Hall 1985). 57 El hecho de que los insecticidas OP pueden inhibir un amplio rango de esterasas, hace suponer que éstos compuestos pueden producir más de una lesión primaria de importancia biológica, que puede depender del tipo de exposición, dosis y tiempo de exposición al insecticida (Chambers y Chambers 1991; Moriarty 1983). La Gamma-glutamil transpeptidasa (GGT) es una enzima que se encuentra en membrana- plasma que ha sido asociada con el transporte de aminoácidos. Se ha sugerido que la enzima puede ser estimulada por asistir en la transferencia de aminoácidos en las células, como un mecanismo de 58 regeneración celular. Aparentemente cataliza la transpeptidación de la fracción y-glutamil de glutation a varios receptores de aminoácidos. La enzima es ampliamente distribuida en tejido animal y puede ser parte de un mecanismo general de detoxificación en mamiferos que u.san glutation (García y Mourelle 1984) Efecto Tóxico del Metíl Paratión El Metil Paratión (MP) es un insecticida y acaricida. Es un potentes neurotó:xico en vertebrados e invertebrados, por interferir con la actividad de la acetilcolinesterasa (AChE) en el sistema neryioso, se absorben fácilmente por inhalación e ingestión, debido a su gran penetración percutánea (Chambers y Chambers 1991; Moriarty 1983). La Acetilcolina (ACh), el sustrato natural para la AChE, es uno de los principales transmisores de impulsos a través de la sinapsis entre las terminaciones nerviosas adyacentes, y a través de las uniones neuromusculares. La ACh liberada por el impulso nervioso, actúa directamente sobre las células motoras, produciendo sus respuestas caracteríaticas. La ACh es normalmente destruida rápidamente por hidrólisis, dando lugar a la colina y al ión acetato, catalizada por la enzima AChE, permitiendo que la fibra nerviosa se acomode para recibir el próximo impulso. El Metil Paratión inhibe a la enzima acetilcolinesterasa (AChE), debido a que los compuestos de ésteres fosforados fijan un grupo fosforilo a la colinesterasa, incapacitando esta enzima para cumplir su función. La inhibición de la AChE significa que ACh persiste mucho más tiempo y las funciones normales del nervio son ampliamente alteradas, y una alteración lo suficientemente severa termina con la muerte (Hassall 1990; Sanz y Repetto 1995). La AChE es una enzima que presenta poca variabilidad genética interindividual (con excepción de los insectos), por lo que una actividad anormal corresponde a una inhibición o estimulacióny no a una forma atípica (Sanz y Repetto 1995). 59 El MP es rápidamente metabolizado por plantas y animales y no se espera que persista o se bioconcentre (Howard 1989), las posibles rutas de destoxificación pueden dealquilar el insecticida dando como producto final el 4-NF que es más hidrosoluble. Muchos de los insecticidas OP son fosforotionatos (P'f), caracterizados por tener un radical -S y tres grupos -OH urtidos al átomo central de fósforo. La molécula de Pf, tal como el MP, no se espera que sea particularmente • tóxica por si misma, pero puede ser bioactivada de forma efectiva por el sistema enzimático (función mixta oxidasa) en el hígado, al metabolito metil para oxon (MPoxon). El MPoxon es alrededor de 3 ordenes de magnitud más potente como agente anti-colinesterasa. Esta bioactivación llamada desulfuración (Fig. 3.1reacción1), libera el sulfuro que es altamente reactivo y puede destruir moléculas cercanas tales como el citocromo P-450, que las produce. El MPoxon es también un importante inhibidor de otras esterasas. La fosforilación de éstas enzimas proporciona alguna protección y destoxificación a través de la destrucción de algunas moléculas del MPoxon (Fig. 3.1 reacción 4). El MPoxon puede ser hidrolizado por A-esterasas, produciendo el 4 -NF y metil fosfato para el MP (Fig. 3.1reacción2). Otro mecanismo para remover éstos compuestos es por la destoxificación activa (catalítica). El citocromo P-450 es capaz de efectuar dos reacciones con los Pf. La reacción de dearilación (reacción lb) y la reacción de dealkilación en la cual uno de los metilos es removido y oxidado a formaldehído (reacción le). Los productos son disociados de alguna manera, produciendo el 4-NF. Otra posible ruta de destoxificación es por medio de las enzimas del tipo glutatión transferasas que pueden dealkilar el insecticida (Chamber y Chambes 1991). ºº OBJETIVO Conocer el efecto ecotoxicológico del MP en los principales organismos acuáticos que habitan la PIR. Cuantificar el contenido de MP en los organismos recolectados en la presa Ignacio Ramírez. Determinar el efecto de los factores fisicoquímicos y ambientales que se presentan en temporada de secas y en temporada de lluvias en la PIR, en la bioconcentración de MP. Mediante el ensayo de la actividad enzimática de la Acetilcolinesterasa (AChE) y Gamma-glutamil transpeptidasa (GGT), en las diferentes especies recolectadas, evaluar los posibles efectos tóxicos por la exposición subcrónica al insecticida MP. P"?teinll s.rina (CHJ0)2 ~=O 4 fosforilación le g2H + (CH 3 0)~-0~N02 1 l ~ destoxificación HO , ~ CH;;-~02 (CH30)2 ~¿;~N02 l la ~ activación 1b (Cfü0)2~-0~02 +S l ~H<>-o -~ '""""" °"""* OI Genncn, frCU1holtw..nstTtvt f\:. Tosikologie ll1d Aefodorteh.ng Grofschoft/Hoci'lsouertcn 0-5948 Sc:/'vnollert>erg Fede«JI ~ OI Genncn, Associote Edton PASCAL DESCHAMPS Mnistére de l'EnvirOf'Wlement et du Cocht de vie · Fronce J()HN P FRAWlEV Heotth & Envirorvnent 1"18fnoTionol ltd · USA ~HAElGAllO ~-Jotnon Medc:al School · USA MllOGOTO GolrutnUn ........ ti!y • Jopan N SETHUNATHAN P.S. STEVN _ ._._...,. Soulh Mico Dra. Laura Martinez Tabche Aquatic Toxicology Lab O.ief ENCB, IPN Plan de Avala v Carpio SIN Col Santo Thomas D.F. MEXICO Dear Dra. Tabche: ,,,_..,.,, ACAQE\AC PQESS ~ &oce a Componv 5'585J'r9et. SU1e 1900 St7i Oego Ct*orr*1 92101 '4\"95 May 5, 1997 lt is with great pleasure that 1 inform you that your manuscript entitled, "Bioac.cumulation of Methyl Parathion and lts Toxicology in Severa! Species of the Freshwater Community in Ignacio Ramirez Dam in Mexico" has been accepted for publication in Ecotoxicology a1u1 E11vironme11tal Safety. The research that you and your colleagues have done is excellent and your presentation meets every criteria necessaiy for a good publication. Congratulationsl 1 look forward to receiving further manuscripts from you in the future. FC:eor/05997h copy: Werner Klein Sincerely, ~ Frederick Coulston, Ph.D. Editor 63 ABSTRACT A serious ecological problem is the widespread environmental contamination by pesticides, including the presence of chemical residues in aquatic wildlife. Methyl Parathion (MP) an widely used organophosphorate insecticide, it is a potent neurotoxic in both vertebrates and invertebrates. The effect of a subchronic exposure · to MP in aquatic organism was evaluated in a natural ecosystem measuring Acetylcholinesterase (AChE) and Gamma Glutamil Transpeptidase (GGT) activity. Two samplings (at two seasons) were conducted. Physicochemical characterisation was done at each sampling time and organisms were collected. MP and the metabolite 4-Nitrophenol (4-NP) concentrations were measured in water sediment and organisms. The major differences in physical features between seasons were an increase of turbidity and salinity, and depletion of dissolved oxygen in the rainy season. MP and 4-NP are bioconcentrated in organisms, in responses to environmental stress. MP concentration was measured in different size/ age and reproductive stages separately. A significant concentration in reproductive tissues (plants)/unbom progeny (animals) was always found, which may affect offspring viability. The metabolite 4-NP is bioaccumulated and is toxic because it causes an increase of AChE activity. GGT increased activity may provides a detoxification mechanism from chronic sublethal exposure to MP, when hepatic glutathione depletion occurs, and may be an indicator of organic damage. INfRODUCTION The considerable benefits of the use of pesticides are partly offset by substantial environmental cost. An ecologically pervasive problem is widespread environmental contamination by pesticides, including the presence of chemical residues in aquatic wildlife (Freedman 1989). The contamination of water sources by pesticides may affect non-target aquatic organisms including fish (Hemández 1990; Rastogi and Kulshrestha 1990). Current pesticidé aplication practice involves the use of less persistent chemicals than the used in the 50' s-60' s. However, the global use of pesticides is expanding in scale and intensity, and although a considerable amount of information exists regarding sorne of the environmental consequences of these practices, other potential effects are poorly understood (Freedman 1989; OMS 1993). The organophosphorous (OP) insecticides are a very effective and widely used group of pesticides in Latin America (OMS 1993). These are potent neurotoxics in both vertebrates and invertebrates. Methyl Parathion (MP; an organophosphorate biocide) is an insecticide u.sed to control boll weevils (Heliothis ~ - ) and many biting or sucking insect 64 65 pests of crops (Meister 1992). Its mechanism of acute toxicity is the inhibition of the enzyme acetylcholinesterase (AChE) in nervous tissue. Methyl parathion is rapidly metabolised by both plants and animals and it is not expected to persist or to bioconcentrate (Howard 1989). The possible route of detoxification is via the glutathione transferases, which can dealkilate the insecticide yielding 4-nitrophenol (4-NP), which is more excretable (Chamber and Chamber 1991). Gamma-glutamil transpeptidase (GG1) is a plasma-membrane-bound enzyme which has been associated with amino-acid transport. It apparently catalyses the transpeptidation of y-glutamil moieties from glutathione to various amino-acid receptors. The enzyme is widely distributed in animal tissues and it may be part of a general detoxification mechanism in mammals using glutathione (García and Mourelle 1984). The purpose of the present study was to characterise the effects of a subchronic exposure to methyl parathion by aquatic organisms including fish, in a natural ecosystem, the Ignacio Ramírez Dam (IRD) in central México. STUDY AREA The Lerma-Chapala basin is the most important hydrological system in the Central Mesa (plateau) in México. Because of widespread habitat deterioration, and since it holds severa! endemic species, the Lerma-River basin has been highlighted as a priority area by institutions concerned with the conservation of nature (CEC 1995). This study was performed in the Ignacio Ramírez Dam (IRD), which was built on La Gavia river sorne 22 km Northeast of Toluca city and 5 km upstream of the confluence with the Lerma river. Aquatic macrofauna includes at least three species endemic to the southern portion of the Mexican high Plateau: The crayfish Cambarellus montezumae, the silverside Chirostoma ~ and the amarillo fish Girardinichtys multiradiatus, as well as the introduced Cyprinus ~· IRD is located at 99° 46' 25" W. G. and 19° 27' 35" N (Fig. 1). Basin area is 505 km2, and has a total storage capacity of 20.5 x 103 m3, of which an accumulated total used volume of 93.3 x 1o3 m3 yearl is obtained and used exclusively for crops irrigation, the mean annual production is 44 x 1o3 tons; the principal crops of the area are maize, oats, forage, potatoes, peas and lima beans (JNEGI 1994). The climate is temperate and sub- humid with summer rains in the months of July, August and September, 67 and annual rainfall of 822.5 mm. The hottest months are May and June and the yearly average temperature is 12.4ºC. Soil erosion is another feature of this catchment area and is caused by water run-off due to deforestation, and by inefficient agricultura! practices on soil with a steep slope, and poor handling of water resources (Boletín Hidrológico No 50 1970). MA TERIALS ANO METHODS Two samplings were conducted at two sites at the IRD; one was in May 21, 1996, during the dry season, and in September 11, 1996, during the rainy season. Although ten sites were sampled each time, we report only on data from the site were organisms were collected. Data on the spatial distribution of MP and 4-NP is analysed elsewhere (de la Vega et al. 1997). Water temperature and concentration of dissolved oxygen at the surface and bottom were determined at the site by using an oxygen-meter (Simpson electric Co. YSI model 51B). Secchi disk transparency was also measured in the open water al the time of water sampling. Additional chemical data were obtained of surface and bottom water at each site (Fig. 1). The concentration of phosphorus, nitrite, nitrate, ammonia, sulfate, suspended solids and turbidity, were determined using colorimehic methods with the aid of a spectrophotometer (Hach DREL model 2000), while hardness (calcium) was measured by EDTA titration. The MP and 4-NP content were determined by gas chromatography, for each water sample in hiplicate, extracting from 50 ml of water with 3 extractions of 25 ml of chromatographic degree methylene chloride- hexane (15:75). The extracts were mixed and evaporated to dryness in a evaporator at 75ºC under, nitrogen atmosphere (Nabawi et al. 1987; Wilson and Bushway 1981). Three sediment samples were taken with a 5.2 x 6 cm diameter conical dredge. The MP and 4-NP extraction was performed by agitation of an exactly weighed sample of sediment with 100 ml of chromatographic- degree methylene chloride-hexane (15:75) for 20 min. The extracts were cleaned by chromatography in a Florisil© column and evaporated to dryness in a evaporator at 75ºC under, nitrogen atmosphere (Butler et al. 1981; Beckert and Avila 1991). The MP and 4NP content were again determined by Gas Chromatography. We looked at MP concentration in tissues of 6 aquatic organisms and 3 hydrophytes (Table 1). These were used because they cover the range of habitat use by aquatic macrofauna and macrofites found at IRD. 68 69 Live specimens were brought to the laboratory. The weight of each organism was obtained, and tissues (whole organisms, except with C. ~ whose gills and musde were used separately) homogenised with 40 g anhydrous sodium sulfate in a mortar. Extractions were made with 100 ml of chromatographic-degree methylene chloride-hexane (15:75) and through mechanical agitation during 30 min. The extracts were cleaned by chromatography in a Florisil © column and evaporated to dryness in a evaporator at 75ºC, under nitrogen atmosphere (Beckert and A vila 1991; Nabawi et al. 1987). The MP and 4NP content were quantified by gas Chromatography. Control organisms were obtained from different sources, with the condition that they had not been exposed to MP or another xenobiotic (Table 2). Chromatographic method. The extracts were resuspended with hexane and analysed by gas chromatography with a Varian model 3400 chromatograph, fitted with a Thermionic Specific Detector (TSD) and a J & W Scientific DB-1 column (fused silica column 15m long, 0.53 mm intemal diameter and l.Sµm. film thickness of methyl sili~on), using helium as the carrier gas at 30 ml/ min. The injector temperature 250ºC, 70 and the detector temperature was 2600C. Temperature programming was used to chromatograph samples: initial column temperature 120ºC was held for one minute, raised to 150ºC at 30°C/min, and held for 2 min, raised to 205° at lü°C/ ~ raised to 240ºC al 2ºC/ min and held for 5 min (Farran et al. 1988; Gluckman et al. 1986; Stan 1989). Enzymatic assay. The isolated tissue from each organism was weighed, placed in 4 ml of Tris buffer and homogenized (pH 7, 2-4ºC). We used gills (fish) or the whole soft parts (other animals). Enzymatic activity was assessed using an aliquot of the tissue homogenate. AChE was assayed by the colorimetric method using acetylcholine as substrate (Hestrin 1949). The Gamma-Glutamyl transpeptidase (GGl) was assayed by the colorim.etric method using P-nitroaniline as substrate (Glosman and Neville 1972). Protein concentration was measured, using an aliquot of tissue, by the colorimetric method (Bradford 1976). Values in figures are expresed as means ± SD. Statistical comparison are based on the nonparametric Friedman rank analisys of variance, because of the small sample size and large variance in the different experimental groups (Sprinthall 1990). 71 RFSULTS Ignacio Ramírez dam has characteristics of a lentic system, with thermal stratification in summer. Water samples of IRD had high values of nitrates, nitrites, total phosphorous, sulfates and hardness; all this parameters imply a seasonal variation in water salts concentration. In the September samples, concentration of ali salts increased, pH showed tendency to acidity in sediment in both sample seasons (Table 3). The soil around the dam has high levels of day, and the eroded soil transported into the dam during the rainy season caused a increase of suspended solids and high turbidity. Such high turbidity results in a decrease in transparency and photosynthetic activity due to rapid quenching of light, also depletion of dissolved oxygen may occur by decomposition of organic mater (Table 3). The major differences in physical features of the IRD between samples were an increase of turbidity and salinity, and depletioil of dissolved oxygen in September (Table 3). The results suggest that IRD is a system in advanced eutrophic state. Methyl parathion and 4-NP were found at IRD in both samples. In sediment, MP was ata higher concentration than in water. In September's water samples, 4-NP was not found and sediment concentration decreased in relation to the May sample, while MP concentration decreased in both water and sediment in September (f able 3). Methyl Parathion Bioconcentration 72 Since 4-NP concentration in tissues ·may be a product of biodegradation (besides of bioaccumulation) of MP, we report MP concentration as L: MP + 4-NP present in organisms tissues. MP was found in all organisms tissues collected in both samples. MP was present in organisms' tissues at higher concentrations than in water or sediment; sorne times differing by several orders of magnitude. Except for the macrophyte Ceratophilum ~ bioaccumulation of MP was present in all the organisms (Table 4). ln May the highest MP bioaccumulation was found in Aeolosoma ~ and in G. multiradiatus in September. It is remarkable that ~ - montezumae eggs had higher bioaccumulation than adult organisms in both samples (Table 4). Organisms collected in both months were Planorbidae, ~ - montezumae and G. multiradiatus. ln the last two species the bioaccumulation level was lower in May than in September, whereas MP concentrationin water and sediment was lower in September than in May (Fig. 2). In September, more organisms were available, and the MP concentration was measured in different size/ age and reproductive stages separately. In the macrophyte Nymphoides ~ MP concentration was lower in steams and leaves than concentration in water. However 73 MP in flowers was higher than in water by several orders of magnitude (Fig. 3) . In the crayfish Cambarellus montezumae MP bioaccumulation was present in adults an juveniles at the same level; in ovigerus females MP concentration was low, but MP in eggs was higher than in adults (Fig. 4). Finally in the fish Girardinichthys multiradiatus bioaccumulation of MP was higher in adult organisms than in juveniles, suggesting that exposition time is importan in MP bioaccumulation. However, pregnant female MP concentration was lower than in adults, whereas the highest MP concentration was found in embryos (Fig. 5). Always a significantly higher MP concentration was found in reproductive tissues (plants)/unborn progeny (eggs or embryos in animals). Enzymatic activity Enzymatic activity (low or high) is always refereed to by comparison with controls. AChE activity was higher than control in all species; the increase in the AChE activity was in the same proportion to the MP bioaccumulation in organism tissues in both sampling events, except for ~- montezumae , were ·a increase in MP bioaccumulation resulted in a slight inhibition of the enzymatic activity (Fig. 6). 74 Gamma-glutamil transpeptidase activity was higher than in controls in all the organisms from both sampling events. The increased activity was in the same proportion than MP bioaccumulation in tissues, except for the planorbid, whose high GGT activity occurred when MP bioaccumulation was low (Fig. 7). DISCUSION Methyl Parathion Bioconcentration Methyl Parathion and the metabolite 4-NP are bioconcentrated in tissue of the aquatic organisms that inhabit IRD. MP concentration in benthic organisms appears to be consequence of prolonged exposure to the insecticide in water and sediment. The higher MP concentration was found in the oligochaete Aeolosoma ~tissue during the dry seasons. This is because Oligochaetes are among the most potent movers of sediment in fresh water, and because they feed deep into the sediment (Me Call and Tevesz 1982). The zooplanctivorous fish G. multiradiatus, an the filter feeding oligochaete Aeolosoma ~ had the higher MP concentrations; because of the zooplancton feeding habits, filter feeding seems to be a lilcely mechanism of MP Bioacumulation which is then passed-on to the next trophic level. 75 During the September sampling, MP concentration in water and sediment decreased, but increased in collected organisms tissue except for Molluscs; in comparison with the May sampling, dissolved oxygen decreased and dissolved solids increased, which suggests that responses to environmental stress promote the insecticide bioconcentration in aquatic organisms. This is because when oxygen concentration and rate of oxygen diffusion in water are low, aquatic animals must increase the surface area of the tissues available for oxygen uptake. They must maximise the flow rate of oxygenated water, to maintain the highest possible concentration of oxygen at their breathing surfaces (Moss 1992). Additionally, since salinity was higher in September, MP bioconcentration may have also been promoted because there is a decrease in the permeability of the exposed membrane8 as an adjustive response to increased salinity (Fry 1978), which again demands an increment in water flow to maintain adequate oxygen supply. 76 Fish force water over the gills by rhythmically filling the mouth with water and then reducing the mouth volume so that the water is forced through the gills, then out through a slit or slits behind the head. When great activity is needed they may simply keep the mouth open (Moss 1992). This increased pass of water through the gills may explain why in ~ · carpio MP concentration was higher in gill than in muscle. Crayfish are crustaceans that possess a caparace which endoses the branchial chamber. Considerable water constantly diffuses into the blood through the gill surfaces of freshwater decapods. Osmotic control and excretion are maintained by two large antennal (green) glands. Crayfish have radiated into nearly every type of aquatic habitat, suggesting that these crustaceans are tolerant and highly adapted, particularly with regards to respiratory physiology. Many species are oxygen-regulators and increase their ventilation rates in response to reduced oxygen. Crayfish are faced with the problems of constant influx of water by osmosis and loss of salts by diffusion. Maintenance of constant body fluid composition is accomplished by active sodium uptake via the gills, n production of a copious hypotonic urine, and by sorne reduction in boundary membrane permeability. Pollutant exposure to lead resulted in damage to gills, which caused a decrease in the uptake of oxygen, an increase in ventilation rates, and increased bioconcentration (Hobbs 1991). We propose that a similar mecanism detérmined MP bioconcentration in h· montezumae. Also, Crayfish play important roles in processing organic matter and in the transformation and flow of energy, feeding virtually at all trophic levels (politrophic); they are capable of switching roles from herbivore/carnivore to scavenger/detritivore merely in response to food availability. Juvenile crayfishes are somewhat limited to detritivory and herbivory as they filter suspended particulate and grasp coarse particles. Adults actively prey and graze on larger items yet they too scrape microbes from hard substrata and shred vegetation. They serve in part as decomposers by breaking down particulate matter, altering the chemical composition of detritus (Hobbs 1991). Obviously a dynamic interaction exists between the externa! environment and the organism. Osmotic controL respiratory physiology and feeding preferences favour the biocumulation of MP in crayfish. 78 Planorbidae and Physidae Gastropoda are Pulmonates, they use a modified portion of the mantle cavity as a lung and lack an operculum. They either rely on surface breathing or have a limited capacity for oxygen transfer across their epithelial tissues. Planorbids also have a respiratory pigmen t, hemoglobin, which increases the efficiency of oxygen transport. Both types of snail have relatively short life cycles, they are usually annual and semelparous. Physidae, at one end of the spectrum, are annual adults that reproduce in the spring and die (there is complete replacement of generations). Physidae and Planorbidae are detritivores or bacteria! feeders, and high bioacumulation is not expected in these organisms. This is consistent with our findings, although physids have adapted to bentic conditions by filling the mantle pocket with water and using itas a derived gill (Brown 1991) which may promote bioconcentration. MP concentration in~- ~ was expected to be higher than in other animals because it is a big fish with long life and extended exposition to pollutants. However, we found a lower MP concentration in carp than in G. multiratiatus, which may be due to a dilution effect becau.se of the high growth-rate of ~- Carpio. Growth is an important factor for pollutant 79 levels in lakes as faster growing fish "dilute" pollutants in the faster growing biomass and, consequently, have lower contaminant levels than slow growing fish, particularly in eutrophic lakes (Larsson 1994). Macrophytes come in a variety of growth forms, including free floating plants and rooted plants whose foliage emerges from water, floats on the surface, or is entirely submerged. Ceratophyllum m.1 a rootless submerged perennial aquatic monoecious plant, present in shallow stagnant or slow moving waters (Rzedowski and Rzedowski 1985) was present in May. In September we found Lemna m- which floats on the surface, has an spongy body with form and size of a lentil (3 mm) and filiform root (Martínez and Matud 1979) and also Nymphoides faJJax, this is an aquatic plant with rooting tubercules, whose foliage emerges from water through long stems and little yellow flowers clusters (2 to 20) submerged before and after a brief blossom and only emerged during • short time (Martínez 1979; Rzedowsky and Rzedowsky 1985). Aquatic specially rootless plants obtain nutrients from the water by means of foliar absorption (Keeley 1991). Our data suggest that the presence of roots (not found in Ceratophylum m) seems to be a risk factor and increases MP bioconcentration in hidrophytes. 80 Our results suggest that MP bioconcentration depends on exposition time to the insecticide, age and bodysize, and on the particular physiology of each organism.. However the higher MP concentration in gonads, eggs and flowers may be due to fat content because a substantial part of an organism energy reserves resides in the gonads, and because females are detoxified during spawning, and pollutants eliminated by roe (Larsson 1994). In~- montezumae, eggs and espermatozoa are exposed to the externa! environment at the time of fertilization, and are more vulnerable to a variety of polluting agents. The high bioconcentration of MP can affect the eggs viability since major damage has been reported in fish. MP produced rupture of oocytes wall, delayed maturity, and reduction in reproductive efficiency (Hemández et al. 1990; Rastogi and Kulshrestha 1990). Enzymatic activity effect. The increase in GGT activity indicates gill damage in fish, and organic damage in other organisms. Sorne authors propase that the increase in enzymatic activity provides a detoxification mechanism from chronic sublethal exposure (García y Mourelle 1984). Since another possible route of detoxification is through the glutathione transferases which can 81 dealkilate the insecti.cide, it appears to be more effecti.ve with dimethyl than diethyl compounds. Although it appears that this pathway is occurring in animals treated with OP insecti.cides since hepatic glutati.one depleti.on occurs, this effect may also be an indicator of liver damage (Hall 1985). In sorne cases, prior depleti.on of glutati.one failed to alter the toxicity of an insecti.cide administered subsequently (Cllambers and Cllambers 1991). Acetykholinesterase activity in organisms collected at IRD increased, which is at odds with the irreversible inhibition reported for acute exposure to organophophate insecticides; this may be due to the presence of 4-NP in tissue as a product of metabolic detoxification of MP and bioaccumulation. A similar phenomenon has been reported for phenol (Assem et al. 1989). Only ~ . montezumae showed a slight inhibition of AChE activity, which may indicate the presence of the highly anticholinesterse metabolite of MP, methyl paraoxon. Sanz and Repetto (1995) observed an increase of AChE activity, anda successive AChE inhibition, in organisms exposed to low doses of OP pesticides. Consequently, despite large differences among species in the activity of the mixed function oxidases and non-specific esterases responsible for the activation an detoxification of organophosphonates, the significance of metabolic transformation as a major determinant of species selectivity in organophosphorus poisoning remams questionable (Kemp and Wallace 1990). 82 The ability to detoxify such harmful compounds is crucial to the survival of organisms. Most organisms have countered exposure to toxic chemicals with the development of detoxification systems to transform, . metabolise, and eliminate such compounds from tissues. In plants, Glutatione S-transferases (GSTs) are enzymes that catalyse the detoxification of xenobiotics. GSTs are not equally distributed among plants, and plants with higher GST activity levels will withstand exposure to toxic substances that will kill susceptible species. Plants have no excretion system, instead, glutatione S-conjugates are either sequestered in the vacuole, or transferred to the apoplast, a processes termed "storage excretion'' (Marrs 1996). lt remams questionable whether MP present in plants tissues is toxic for them; and whether aquatic plants have enough GST activity to detoxify MP or other xenobiotics. We found that MP is toxic for organisms inhabiting the IRD, as they face chronk exposure, and because MP may be bioconcentrated 83 becoming lethal or sublethal (since enzymatic activity suggests organic damage) . Repeated sublethal doses of MP can lead to the development of tolerance to the irreversible inhibition of AChE (Kemp and Wallace 1990; Yang et al. 1990). However the metabolite 4-NP is bioaccumulated and is neurotoxic because it causes an increase of AChE activity (Hassall1990). Since 4-NP can be conjugated and made more water-soluble and readily excretable in the urine by such enzymes as uridine diphosphoglucoronosyl transferases or by sulfotransferases (Chambers and Chambers 1991), bioaccumulation may indicate a decrease in the activity of this enzymes or a damage in the elimination systems of the studied organisms. Pollutants are frequently presents in fresh water at concentrations too low to cause rapid death. However, the environment characteristics and organisms' physiology and ecology promote the bioconentration of pollutants, which may become lethal or cause a malfunction, ultimately reducing the fitness of exposed organisms. These sublethal effects may be observed in organisms at the biochemical, physiological, developmental or life cycle level. Death is always preceded by lesser symptoms or malfunction, and a major concem in ecology is the frequency and 84 extension to which plants and animals may survive the impact of pollution. It is reasonable to argue that any effect that impairs an organisms ability to respond to its environment is likely to diminish its reproductive output, thus affecting the sustainability of populations. That IRD (and indeed the whole of the Lerma basin) holds a number of endemic species, while also concentrates the wash-outs of countless agricultura! lands, this implies that the health of this region aquatic communities should by a matter of concem. Most species of the family Goodeidae are native to this basin, and all are viviparous, thus MP (or other pollutants) bioacumulation in embryos pose a serious risk for this family of native fish. CONCLUSIONS Enzimatic activity provides evidence of MP toxicity to organisms at IRD. However it is necessary to evaluate if the observed effect of reducing the organisms' viability or the sulx:hronic exposure produce sorne adaptative process leading to resistence to permits the organisms to face hig levels of MP. This is important because MP is bioaccumulated at the highest concentration in eggs, embryos and flower principaly, and it is necesary to evaluate the efect in the viability of this. ACKNOWLEDGMENTS We thank Liliana Favari for technical assistance and facilities in enzymatic assays. Francisco Rojo for GC analytiall support. Ednnmdo Oiaz for facilities in sample rolection. Javier Manjarres and jorge Valeriana for llS6istance in organisms collection. 85 TABLE l . ORGANISMS COLLECTED AT IRD DURING THE DRY SEASON (MA Y) ANP THE RAINY SEASON (SEPTEMBER), AND HA BIT ATUSE. Taxa May September Habitat use/life Feeding habits fonn FISHES Girardinichthys p p Shore-d weller Zooplanctivorous multiradiatus Cyprinus carpio NC p Bottom-d weller Bottom-feeder MOLLUSCA- GASTRODODA Physidae A p widespread Detritivorous bottom-dweller Planorbidae p p Macrophytes Detritivorous DECAPODA. Cambarellus montezumae p p Bottom-dweller Omnivorous OLIGOCHAETA Aeolosoma ~· p A Bottom-d weller Filter-feeders MACROPHYfES Ceratophyllum ~ · p A non-rooting submerged Lernna~ A p rooted floating Nymphoides ~- A p rooted, floating lea ves P=present. A=absent. NC= No sampled. 86 TABLE 2. SOURCE OF CONTROL ORGANISMS TAXA SOURCE Q. multiradiatus Laboratorio Ecología Conductua!. Intituto de Ecologia. Universidad Nacional Autonoma de México. Planorbidae Laboratorio Ecología Conductual. Intituto de Ecología. Universidad Nacional Autonoma de México. k ~ Small irrigation dam at Universidad Autonoma del Estado de México Campus el cerrillo. k montezumae Small irrigation dam at Universidad Autonoma del Estado de México Campus el cerrillo. Physidae Small irrigation dam at Universidad Autonoma del Estado de México Campus el cerrillo. TABLE 3. PHYSICOCHEMICAL CHARACTERISilCS OF WATER AND SEDIMENT FROM IRD DURING THE DRY SEASON (MA Y) AND THE RAINY SEASON (SEPTEMBER). MA Y SEPTEMBER T°C 18.5 17 Transparency (m) Dissolved oxygen (mg/L) pH water pH sediment Turbidity (FfU) Suspended solids (mg/L) Hardness (mg/L) Nitrite-nitrogen (mg/L) Nitrate-nit1"9gen (mg/L) Ammonium-nitrogen (mg/L) Sulphates (mg/L) Phosphorus (mg/L) Methyl Parathion (water) (mg/L) Methyl Parathion (sediment) (mg/Kg) 4-Nitrophenol (water) (mg/L) 4-Nitrophenol (sediment) (mg/Kg) 21 6.7 7.0 6.44 25 10 100 0.01 3 0.5 15 0.2 0.0001 0.0007 0.018 (0.25) 0.567 (3.7) 0.2 3 7.6 6.71 230s 130s 230s 0.15 8 2.0 35s 0.4 0.00005 0.00026 ND 0.015 87 Dates in parenthesis of 4-NF concentration in May; correspond to the greatest concentration found at IRD, not at sampling site. ND= non detectable. s = lndicators of high salinity TABLE 4. BIOACCUMULA TION F ACTORS OF MP IN Tl55UES IN ORGANISMS COLLECTED AT IRD IN BOTH SEASONS. T AX.A MA Y SEPTEMBER º· montezumae 8.8 509 º· montezumae (eggs) 293 5000 Aeolosoma ~ ­ Planorbidae Physidae ~- multiradiatus º· carpio (gill) º· carpio (muscle) Cerathophyllurn ~­ Lemna ~ . Nymphoides ~ (stem/leaf) Nymphoides ~ - (flower) 135 17 4 1 36 4000 13461 221 76 6.55 0.27 735 Bioaccumulation Factor= MP Concentration in tissue/MP Concentration in water. 118 99" 150'00"' 99º '48'00" 11cal1 1:20000 1 T i°° t - .. • I' Metera 511 DlllO N 99º146' 00" ' Almoloya 19• 2e· oo~ 19' 26'00" FIG. 1. Ignacio Ramirez Dam location and organisms collection site A. 00 ID -~ O'> .§. e: ¡ ~ Q) o e: 8 o.. :E 2.5 ~ - - - - - - - - - - - - - - - .- - - - - - - - - - -- - - - - - - .... -- - - - - 2 1.5 0.5 t o M 5 Ctratophilwn Lemna 3 -5- + + 5 5 Nymphoidea Phi9id1e 3 a ~ M 7 j) 5 Planorbidoe 7 a M _2~ b + 5 8 a M 8 b t 5 f 50 2 f 5 M C. montezumae G. multiradlatus C. carplo Aeolotoma FIG. 2. Methyl Parathion (MP) concentration in tissue of organisms collected in May (M) and in September (5). Numbers by IN bar indlcate tht number of organismo assayed; letters indicate the statistical significance (Friedm•n ANOV A). Different letters are used whe the statistical difference is significant (P<0.05) between each sampling time. E ::::::- º E :::1 w ~ ~ """ ..... d (\1 ..... d ..... d ~ d 8 d ;:!; d ~ di o 5 5 a a - + e s Physidae 3 b - -3 - b + 3 - :; - b e -!-f-+ 5 3 - 3 - - - a- - - ~ e e a t C M S Planorbidae + + 4- e M s e M s C. montezumae G. multiradiatus Taxa 10 a + 5 a -e s G. multiradiatus embryos 3 -a- + 2 e ·-+ e s C. carpio FIG. 6.Acetil cholinesterase (AChE) activity in tissue of control organisms (q and in organisms collected at IRD in May (M) and in September (S). Numbers by the bar indicate the number of organisms asayed; letters by the bar indicate the statistical significance (Friedman ANOV A), different letters indica te that the difference is significant (P<0.05) between each sampling time and control organisms. 'f. G G T um ol /m g mi n A e a e a. 5 c 5 c 3 20 +--- uk -- E de E o e pu co o E RD e cor cos e o o A A o q a ; T + ; a 3 a e ma 3 -- 10 pr" - - ----- 0 0 MN o ri Ns AR A e A ER AA A mo 3 g ? . 3 10 5 a » > a a a a. E uo q == 0 Cc S C S C Ss Cc M Ss ¿”Ss e S] Physidae Planorbidae C. montezumae G. multiradiatus G. multiradiatus C. carpio Taxa embryos FIG. 7. Gamma Glutamil Transpeptidase (GGT) activityin tissue of control organisms (C) and organisms collected in May (M) and in September (S). Numbers by the bar indicate the number of organisms assayed ; letters indicate statistical significance (Friedman ANOVA), diferent letter is used when the statisrical difference is significant (P<0,05). 40 2 ~ .... e: ·e O> ~ o E :J ~ (!) 30 ·- -- -· ·- - - - - -- - - - - - - ·- - - - -· - - - -·· - - 20 10 5 t- e t 3 - 3 b + - 5 a b ..... e t - j) --... .e - t 0 ++ 2 t O MS MS S é S C e s ysidae la orbidae . ontezu ae . ultiradiatus . ultiradiatus C. car io ruca bryos I . . a ma lutamil r nspeptidase ( T) ti it in tiss e f ntrol r is s (Q d r is s ll cted i ay ( ) a d i e te ber ( ). umbers y t e ar i icate t e ber f r a is s assayed; letters i icate statistical si ifica ce ( rie an OV A), if rent l tt r is sed hen t e st tisri al iff r ce is si ifi ant ( 0. 5).